Analysis of Tricyclic Antidepressants in Human Urine Using UltraPerformance Convergence Chromatography (UPC2)

Význam tématu

Tricyklická antidepresiva (TCA) zůstávají cenově dostupnou a farmakologicky významnou skupinou léčiv, u nichž je potřeba rychlých a citlivých bioanalytických metod pro kvantifikaci v biologických vzorcích.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem práce bylo demonstrovat využití UltraPerformance Convergence Chromatography (UPC 2) k separaci a kvantifikaci pěti TCA v lidské moči s důrazem na šetrné chromatografické podmínky, rychlý čas analýzy a vysokou přesnost kvantifikace.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky moči podstoupily extrakci pomocí Oasis WCX 96-well μElution SPE formátu. Následná chromatografie proběhla na systému ACQUITY UPC 2 spojeném s hmotnostním spektrometrem Xevo TQ-S. Detekce probíhala v režimu pozitivní ESI se stanovenými kvantifikačními reakcemi (MRM).

• Chromatograf: ACQUITY UPC 2 System
• Kolona: ACQUITY UPC 2 BEH 2.1×50 mm, 1.7 µm
• Mobilní fáze A: CO₂; mobilní fáze B: 0.2 % NH₄OH v methanolu; gradient 2 %→40 % B za 2 min, následně 1 min při 30 % B
• Průtok: 1.4 mL/min; teplota kolony 40 °C; teplota vzorku 10 °C; objem injekce 2 µL; cyklus 3 min
• Mass spectrometer: Xevo TQ-S, ESI+, optimalizované kuželové napětí a kolizní energie

Hlavní výsledky a diskuse

Optimalizovaná SPE obnovila TCA z lidské moči v rozmezí 92–104 % s RSD 3–6 %. Screening čtyř různých UPC 2 stacionárních fází ukázal, že BEH kolona ve spojení s 0.2 % NH₄OH v methanolu poskytuje nejlepší citlivost a úzké šířky píků (< 2 s). LLOQ 0,1 ng/mL bylo dosaženo pro všechny analyty, s poměrem signál/šum > 60:1 a linearitou R² > 0,998.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda spojuje ekologičnost (CO₂ jako primární rozpouštědlo), zkrácený čas analýzy (3 min), přímou injekci neředěného SPE eluátu a vysokou selektivitu a citlivost, což usnadňuje rutinní bioanalytické nasazení.

Budoucí trendy a možnosti využití

UPC 2 lze dále rozšiřovat pro analýzu širšího spektra farmaceutických a toxikologických cílů. Automatizace sample‐preparation, nové typy stacionárních fází a použití pufrovaných modifierů slibují další zkrácení metod a zvýšení robustnosti.

Závěr

UltraPerformance Convergence Chromatography představuje efektivní platformu pro kvantitativní bioanalýzu tricyklických antidepresiv v biologických vzorcích. Spojením rychlosti, šetrnosti k životnímu prostředí a vysoké citlivosti splňuje nároky moderních analytických laboratoří.

Reference

1. Baker GB, Coutts RT, Holt A. Derivatization with acetic anhydride: Applications to the analysis of biogenic amines and psychiatric drugs by GC and MS. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 1994;31(3):141–148.
2. Cantú M, Toso D, Lacerda C, Lanças F, Carrilho E, Queiroz M. Optimization of solid-phase microextraction procedures for the determination of tricyclic antidepressants in plasma by LC. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 2006;386(2):256–263.
3. Santos-Neto AJ, Bergquist M, Lanças FM, Sjöberg PJ. Simultaneous analysis of five antidepressant drugs using direct injection of biofluids in a restricted-access media-LC–MS/MS system. Journal of Chromatography A. 2008;1189(1-2):514–522.
4. Chambers E, Wagrowski-Diehl DM, Lu Z, Mazzeo JR. Systematic and comprehensive strategy for reducing matrix effects in LC/MS/MS analyses. Journal of Chromatography B. 2007;852(1-2):22–34.