IEX Method Transfer: Replicating a Method for Monoclonal Antibody Analysis on an ACQUITY Arc System

Význam tématu

Ionově výměnná chromatografie (IEX) je klíčová pro kontrolu kvality a stability monoklonálních protilátek v biotechnologickém průmyslu. Monitorování nabíjecích variant zajišťuje, že změny během fermentace, purifikace či formulace neovlivní účinnost a bezpečnost bioléčiv.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo demonstrovat bezproblémový přenos zavedené iontově výměnné metodiky z legacy HPLC platformy (Agilent 1100) na moderní ACQUITY Arc System. Studie porovnává chromatografické parametry, reprodukovatelnost a kvalitu separace variant monoklonální protilátky rituximab.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda byla převzata z USP Medicines Compendium a nebyla měněna při přechodu na ACQUITY Arc System. Základní parametry:

• Kolona: Dionex ProPac WCX-10, 4,0 × 250 mm, 10 µm
• Teplota kolony: 30 °C
• Mobilní fáze A: 0,02 M MES, pH 6,0; mobilní fáze B: 0,02 M MES + 0,4 M NaCl, pH 6,0
• Detekce: UV při 280 nm, vzorkovací frekvence 20 Hz
• Gradient: konstantní průtok 0,7 mL/min s přechodem z 100 % A na 100 % B během 100 min
• Vzorek: 1 mg/mL rituximab ve 0,15 M NaCl, 0,025 M Na-citrát, 0,06 % polysorbátu 80, udržovaný při 5 °C

Použitá instrumentace:

• ACQUITY Arc System s Arc Multi-flow path™ technology
• 2489 UV/Visible detektor
• Agilent 1100 Series HPLC System s quaternary pumpou a DAD detektorem
• Empower 3 Chromatography Data Software

Hlavní výsledky a diskuse

Chromatogramy získané na obou systémech vykázaly téměř identické retention times a selektivitu. Relativní rozdíly v retenčních časech hlavního píku (MP) a variant (1A–3A, 1B–3B) byly menší než 0,01. Rozlišení MP a lysinové varianty (1B) dosáhlo hodnoty 1,95 ± 0,02 na Agilent 1100 a 2,09 ± 0,02 na ACQUITY Arc, obě splňují USP požadavky (> 1,5).
Reprodukovatelnost na ACQUITY Arc byla potvrzena overlay chromatogramů pěti injekcí, kde rozdíly v plochách píku hlavní špičky a nabitých variant nevyšly nad 1 % (Δ acidic 0,38 %, Δ main peak 0,53 %, Δ basic -0,90 %).

Přínosy a praktické využití metody

Možnost zachovat stávající procesní metody bez úpravy parametrů šetří čas na validaci a přináší konzistentní výsledky mezi laboratořemi i přístroji. Technologie Arc Multi-flow path umožňuje plynulý přechod mezi HPLC a UHPLC platformami a rozšiřuje kapacitu a efektivitu analýz IEX.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozvoj kvaternárních pump a multikanálových průtokových cest otevírá cestu k automatizaci metodických přenosů, online monitorování výrobních šarží a vyšší úrovni kvality dat. Kombinace IEX s hmotnostní spektrometrií či multidimenzionální chromatografií povede k hlubší charakterizaci nabíjecích variant a posttranslačních modifikací.

Závěr

Přenos IEX metody pro analýzu monoklonální protilátky mezi HPLC platformami na ACQUITY Arc System potvrdil vysokou věrnost a reprodukovatelnost separačních podmínek. Arc Multi-flow path technologie umožňuje zachovat nebo zlepšit stávající analytické postupy bez nutnosti úprav parametrů.

Reference

1. U.S. Pharmacopeial Convention. USP Medicines Compendium (2015)