METHOD DEVELOPMENT - The Path to Successful Drug Development Starts with Purposeful Method Development

Význam tématu

V laboratořích farmaceutické kvality (QC) existuje značné množství existujících metod založených na HPLC. S nástupem technologií UPLC® se nabízí výhody ve formě vyšší rychlosti, nižší spotřeby rozpouštědel a lepší rozlišení. Přechod k UPLC však vyžaduje udržení integrity schválených kompendiálních a interních metod. Metoda translace usnadňuje bezchybné provedení těchto změn, čímž se šetří čas, snižují náklady a maximalizuje využití stávajícího vybavení.

Cíle a přehled článku

Cílem je ukázat postup pro překlad existujících HPLC metod (kompendiální i interních) na UPLC a opačně s důrazem na zachování stejných analytických parametrů. Příklad je uveden na třech kompendiálních metodách: galantamin, isoflavony z sójového extraktu a loratadin, včetně příkladů mezi různými LC systémy.

Použitá metodika a instrumentace

• Instrumentace: ACQUITY UPLC H-Class a běžné HPLC systémy (např. Alliance 2695).
• Sloupce: UPLC sub-2 µm série BEH, HSS, CSH a ekvivalentní HPLC sloupce ve 5 µm (např. XBridge, XSelect).
• Software: Empower™ 2/CDS, ACQUITY UPLC Columns Calculator, Reversed-Phase Column Selectivity Chart a Method Transfer Kits.
• Stabilní detekce: PDA nebo UV dle originální metody, úprava gradientu a průtoku podle výpočtu.

Hlavní výsledky a diskuse

• Firma Waters zasazuje systém translace pro HPLC→UPLC a UPLC→HPLC: zohlednění rozdílů v objemu pumpy (dwell volume) a zachování gradientu pomocí Columns Calculatoru.
• Pro zachování selektivity vyhledána „ekvivalentní“ fáze v Reversed-Phase Selectivity Chart: např. Atlantis T3→HSS T3.
• Metoda galantaminu: stejná L/dp a gradient přeložen z HPLC (XBridge C18, 4.6×100 mm, 3.5 µm) na UPLC CSH C18 (2.1×50 mm, 1.7 µm) bez ztráty rozlišení. RRT a USP parametry odpovídaly.
• Sójové isoflavony (75 min HPLC) zkráceny na 16 min UPLC se zachováním lineárnosti (R2>0,999) a srovnatelnými údaji o špičkovosti.
• Loratadin a 9 substancí: přeložen z UPLC (10 min) na běžné HPLC (XSelect C18, 5 µm) s identickými RRT hodnotami napříč třemi různými systémy.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá implementace nových metod v rutině QC bez nutnosti nových farmaceutických schválení (nízká rizika odchylky od schválených kritérií).
• Snížení spotřeby rozpouštědel a úspora času: až 3–5× rychlejší analýzy.
• Zvýšení využití existujících investic do HPLC a postupný přechod na UPLC.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další rozšiřování databází ekvivalentních sloupcových selektivit.
• Integrované nástroje pro automatické přepočty gradientů a průtoků v systémovém softwaru.
• Využití umělé inteligence pro předpověď optimálních parametrů translace.

Závěr

Metody translace výrazně zefektivňují přechod mezi HPLC a UPLC, což přináší řadu výhod z hlediska rychlosti, nákladů a využití stávajícího vybavení. Klíčovými aspekty jsou porozumění L/dp, korekce pro rozdíly v dwell volume a výběr ekvivalentních či stejných stacionárních fází. Pomocí softwarových nástrojů jako Columns Calculator, Selectivity Chart a Method Transfer Kits lze metody přeložit bez kompromisů v analytické kvalitě.

Reference

• Galantamine Hydrobromide: USP32-NF27, Supplement No. 2, strana 4245.
• Powdered Soy Isoflavones Extract: USP32-NF27, strana 1074.
• Loratadine: USP32-NF27, strana 2805.