Repeatability and Quantitation in a Method Using the Alliance HPLC System with the 2998 Photodiode Array Detector and the ACQUITY QDa Detector

Význam tématu

High Performance Liquid Chromatography (HPLC) je klíčová pro separaci a kvantifikaci farmaceutických látek. Integrace ortogonálních detekčních technik, jako je fotodiová matice (PDA) a hmotnostní detekce (QDa), významně zvyšuje spolehlivost identifikace a hodnocení homogenity analytů. Zajištění opakovatelnosti, stability retenčních časů a širokého dynamického rozsahu je nezbytné pro aplikace v oblasti QA/QC a farmaceutického vývoje.

Cíle a přehled studie

Studie se zaměřila na validaci HPLC metody pro identifikaci a přesnou kvantifikaci irbesartanu (API) a související sloučeniny A. Cílem bylo demonstrovat sladění dynamických rozsahů PDA a QDa detekce pomocí přístrojové konfigurace split-and-dilute a prokázat vysokou opakovatelnost retenčních časů, ploch chromatogramů a linearitu kalibrace ve vybraném rozsahu koncentrací.

Použitá metodika

Irbesartan byl připraven jako 1 mg/mL standardní roztok v metanolu. Související sloučenina A byla analyzována v šesti koncentracích od 0,0005 do 0,250 mg/mL při konstantní úrovni API 0,100 mg/mL. Rozdělení proudu mezi PDA a QDa detektor zajišťoval Isocratic Solvent Manager s Alliance Splitter Kitem. Kolonka XSelect HSS T3 (4,6×250 mm, 5 µm) pracovala při 40 °C s gradientem voda–acetonitril–kyselina mravenčí. Průtok mobilní fází byl 1,0 mL/min, injekční objem 10 µL. PDA detekce probíhala ve spektru 210–400 nm (detekční vlnová délka 254 nm), MS v režimu ESI+ sledoval ionty m/z 429,4 (API) a 447,3 (sloučenina A).

Použitá instrumentace

• Alliance HPLC System
• Waters 2998 Photodiode Array Detector
• ACQUITY QDa Mass Detector
• ACQUITY Isocratic Solvent Manager s Alliance Splitter Kit
• Waters XSelect HSS T3 kolonka (4,6 mm × 250 mm, 5 µm)
• Empower 3 FR2 CDS software

Hlavní výsledky a diskuse

Retenční časy irbesartanu a sloučeniny A vykázaly relativní směrodatnou odchylku (RSD) menší než 0,1 % u obou detektorů. Opakovatelnost plochy byla u sloučeniny A <0,15 % (PDA) a <1,5 % (QDa). Linearita kalibrace byla potvrzena v rozsahu 0,0005–0,250 mg/mL na PDA (r2 = 0,9999) a 0,0005–0,050 mg/mL na QDa (r2 = 0,995). Split-and-dilute konfigurace efektivně sladila citlivost obou detekčních technik.

Přínosy a praktické využití metody

• Zvýšená jistota v identifikaci a homogeneity špiček
• Široký a sladěný dynamický rozsah detektorů
• Simultánní akvizice a analýza dat v jednom uživatelském rozhraní Empower
• Jednodušší validace a standardizace analytických protokolů v QA/QC

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se širší nasazení integrovaných HPLC-PDA-MS systémů pro procesní analytiku (PAT) a online monitoring výrobních procesů. Další rozvoj softwarového zpracování ortogonálních dat a automatizace vyhodnocování komplexních vzorků zvýší efektivitu laboratoří. Miniaturizace systémů a nové typy kolonek mohou dále zkrátit dobu analýzy v biotechnologii a farmaceutickém výzkumu.

Závěr

Kombinace PDA a hmotnostní detekce na jednom HPLC systému s konfigurací split-and-dilute prokázala vysokou opakovatelnost, linearitu kalibrací a důvěru v identifikaci irbesartanu a související sloučeniny. Empower 3 FR2 CDS poskytuje centralizovanou správu a vyhodnocení dat, což usnadňuje implementaci této metody v rutinních QA/QC laboratorních postupech.

Reference

• Chavali A, Wheat TE, McConville P. Repeatability and Quantitation in a Method Using the Alliance HPLC System with the 2998 Photodiode Array Detector and the ACQUITY QDa Detector. Waters Corporation, 2014.