Measuring Estrogens at Low Levels in Plasma

Význam tématu

Měření nízkých hladin estronu a estradiolu v lidské plazmě je klíčové pro výzkum endokrinních funkcí a pro porozumění hormonálně závislým onemocněním. Konvenční imunoanalytické metody často trpí průniky ze strukturně podobných steroidů a metabolitů, což omezuje jejich selektivitu a spolehlivost.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout vysoce selektivní a citlivou kvantitativní metodu pro stanovení estronu (E1) a estradiolu (E2) v lidské plazmě v rozsahu pmol/L. Studie demonstrovala novou plně integrovanou online SPE–LC–MS/MS platformu s krátkou analytickou dobou.

Použitá metodika

Popis přípravy vzorku:

• 250 µL plazmy extrahováno s 900 µL methylterc‐butyl ether (MTBE) pomocí SPE
• Suché extrakty rekonstituovány v 100 µL 40% metanolu
• OSM cartridge kondicionována metanolem a vodou
• 75 µL vzorku s 0,5 mL vody naloženo na cartridge, promyto 30% metanolem
• Eluce analyzátů přímo na analytickou kolonu

Použitá instrumentace

• LC systém: ACQUITY UPLC
• MS detektor: Xevo TQ-S v negativním ionizačním režimu
• Chromatografická kolona: ACQUITY UPLC C18 SB, 1,8 µm, 2,1 × 30 mm
• Online SPE: ACQUITY UPLC Online SPE Manager s MassTrak C18 OSM cartridgem

Hlavní výsledky a diskuse

• Limit kvantifikace (LLOQ): 6 pmol/L pro estron, 10 pmol/L pro estradiol
• Lineární rozsah až do 2000 nmol/L pro estradiol
• Analýza trvá méně než 5 minut na vzorek
• Minimální matriceové efekty díky online SPE
• Optimální oddělení a kvantifikace s deuterovanými interními standardy

Přínosy a praktické využití metody

• Simultánní stanovení E1 a E2 v jednom analytickém běhu
• Jednoduchá příprava vzorku bez derivatizace
• Rychlá doba analýzy vhodná pro vysokoprůchodové studie
• Vysoká citlivost a selektivita pro klinický i akademický výzkum

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření aplikace na další hormonální analyty
• Plná automatizace a integrace do moderních laboratorních provozů
• Zlepšení citlivosti pomocí nových ionizačních technik
• Využití v personalizované medicíně a monitorování hormonálních poruch

Závěr

Navržená metoda online SPE–LC–MS/MS prokazuje vysokou robustnost, citlivost a rychlost při stanovení estronu a estradiolu na úrovni pmol/L, čímž významně překonává limity tradičních imunoanalytických přístupů.

Reference

1. Owen L., Keevil B. Measuring estrogens at low levels in plasma. Technical Brief. Waters Corporation, 2014.