Aflatoxin Analysis in Infant Formula with Enhanced Matrix Removal— Lipid by LC/MS/MS

Význam tématu

Aflatoxiny představují vysoce toxické mykotoxiny, které mohou kontaminovat mléčné produkty a kojenecké výživy. Aflatoxin M1 je hlavní formou v mléce s regulačními limity až 0,025 µg/kg v EU a 0,5 µg/kg v USA. Přesné a citlivé stanovení těchto toxinů je klíčové pro ochranu zdraví nejmenších konzumentů.

Cíle a přehled studie

Cílem aplikace bylo vyvinout a ověřit metodu LC/MS/MS pro simultánní stanovení aflatoxinů M1, G2, G1, B2 a B1 v tekuté kojenecké výživě. Metoda kombinuje QuEChERS extrakci a čištění dispersní SPE s Agilent Bond Elut EMR–Lipid sorbentem s následnou koncentrací pod dusíkem, přičemž má dosáhnout LOQ pod regulačními limity a zajistit vysokou průkaznost.

Použitá instrumentace

• Agilent 1290 Infinity LC (Binary Pump G4220A, Autosampler G4226A, Termostat kolony G1316C)
• Kolona Agilent Poroshell 120 SB-C18 2,1×100 mm, 2,7 µm s příslušným UHPLC guard
• Agilent 6460A Triple Quadrupole LC/MS/MS s Jet Stream ESI
• Software Agilent MassHunter Workstation

Použitá metodika

• Vzorek: 10 mL tekuté kojenecké výživy, přidání 10 mL acetonitrilu a QuEChERS solí
• Vortex, centrifugace, čištění EMR–Lipid dSPE a přídavek MgSO₄ (polish pouch)
• Koncentrace extraktu 10× pod dusíkem při 50 °C, rekonstituce v 100 µL 80/20 H₂O/ACN (0,1 % FA)
• LC gradient: 20→70→95 % organické fáze (5 mM NH₄ formiát/ACN–MeOH 1:1+0,1 % FA), 0,3 mL/min, 40 °C, injekce 5 µL
• MS/MS: ESI pozitivní režim, dMRM přechody pro každou analyzu, segmentace 0–2 min (Waste), 2–11 min (MS)

Hlavní výsledky a diskuse

• Recoveries 88–113 % (průměr 101 %), RSD < 5 % ve třech QC úrovních
• LOQ: 0,01 ng/mL pro M1, 0,05 ng/mL pro G2, G1, B2, B1 – pod evropskými a americkými limity
• Lineární rozsah: M1 0,01–2,50 ng/mL (R² = 0,9931), ostatní 0,05–12,5 ng/mL (R² > 0,9986)
• Matrix effects ± 13 % díky selektivní lipidové destrukci EMR–Lipid, zajištěna vysoká čistota extraktu
• Incurred sample (ERM-BD283): naměřeno 0,0101 ng/mL (v souladu s certifikovaným 0,0111 ng/mL po desetinnásobném ředění)

Přínosy a praktické využití metody

• Jednoduché zavedení ve standardních potravinářských laboratořích bez nutnosti imunoadsorpčních kolon
• Snížená údržba chromatografu, stabilní chromatografie a minimalizace znečištění
• Možnost rozšíření pro multicílové mykotoxinové metody díky univerzální selektivitě EMR–Lipid

Budoucí trendy a možnosti využití

• Aplikace EMR–Lipid na další lipidově bohaté matice (masné výrobky, výrobky z vajec)
• Rozšíření metody o další třídy toxikantů a kompletní screening mykotoxinů
• Integrace do automatizovaných vysokoprodukčních linek pro monitoring kvality

Závěr

Vyvinutá metoda LC/MS/MS s čištěním EMR–Lipid nabízí vysokou citlivost, přesnost a reprodukovatelnost pro stanovení aflatoxinů v kojenecké výživě. LOQ pod regulačními limity, efektivní odstraňování lipidů a jednoduchá implementace ji předurčují pro rutinní analýzy.

Reference

1. Jard G. et al. Food Addit. Contam. Part A, 2011, 28(11), 1590–1609.
2. Wang H. et al. Food Addit. Contam. Part A, 2010, 27(9), 1261–1265.
3. Sartori A.V. et al. Food Anal. Methods, 2015, 8(9), 2321–2330.
4. Commission Regulation (EC) No 1881/2006.
5. FDA Guidance for Industry: Action Levels for Aflatoxins in Milk.