Agilent 1290 Infinity II LC with ISET–Emulation of the Waters Acquity H-Class for Ternary Gradients

Význam tématu

Emulace chromatografických metod mezi různými HPLC/UHPLC systémy je klíčová pro zajištění konzistence výsledků a pro usnadnění přenosu validovaných metod bez nutnosti jejich úprav. Použití inteligentní emulace (ISET) umožňuje přesně reprodukovat gradienty i hydrodynamické podmínky originálních přístrojů, což ušetří čas, náklady a minimalizuje riziko chyb při převodu analytických metod.

Cíle a přehled studie

Cílem aplikace bylo ukázat schopnost Agilent 1290 Infinity II LC vybaveného technologií ISET emulovat ternární gradient na systému Waters Acquity H-Class při analýze pěti peptidů. Studie porovnala chromatogramy získané na systému Waters bez úprav a na přístroji Agilent s ISET i bez něj a hodnotila shodu retencí.

Použitá metodika a instrumentace

Chromatografie proběhla s mobilní fází tvořenou vodou (A), acetonitrilem (B) a 1% roztokem TFA (C) za ternárního gradientu při průtoku 0,5 mL/min a teplotě kolony 50 °C. Vzorem byla standardní směs pěti peptidů. Detekce probíhala DAD při 214 nm. Konkrétní přístroje:

• Agilent 1290 Infinity II LC s flexibilním pumpovacím modulem G7104A
• Multisampler G7167B a multikolonový termostat G7116B
• Diodový array detektor G7117B s 10 mm Max-Light kazetou
• Waters Acquity H-Class s BioQuaternary Managerem a BioSample Managerem FTN

Hlavní výsledky a diskuse

Bez aktivované ISET byla na Agilent 1290 pozorována odchylka retencí až 6 % oproti Waters systému, překračující doporučenou toleranci. Po nasazení ISET došlo k redukci rozdílů pod 2,3 %, což odpovídá více než 97% shodě retencí. Koeficient variace retencí pro opakované injekce byl nízký (<0,2 %), potvrzující vysokou opakovatelnost.

Přínosy a praktické využití metody

Technologie ISET umožňuje:

• Bezproblémový přenos existujících metod z různých HPLC/UHPLC systémů
• Minimalizaci nákladů na vývoj a validaci nových metod
• Využití vysokého výkonnostního potenciálu systému Agilent 1290 Infinity II LC

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření ISET na další typy chromatografických systémů a širší integrace s kontrolním softwarem pro automatizaci převodů metod. Dále je perspektivní kombinace emulace s prediktivními modely chromatografie pro zrychlený návrh gradientů.

Závěr

Nasazení Agilent ISET na 1290 Infinity II LC pro emulaci ternárního gradientu Waters Acquity H-Class prokázalo vysoce přesné přenesení retencí peptidů s dohodou nad 97 %. Technologie představuje efektivní nástroj pro bezúdržbový převod analytických metod mezi různými LC systémy.

Reference

1. Gratzfeld-Huesgen A. Fast and flexible optimization of buffer/modifier concentrations using ternary gradients with the Agilent 1260 Infinity LC Quaternary System. Agilent Technologies Application Note 5990-6864EN, 2010.
2. Gratzfeld-Huesgen A. Agilent 1290 Infinity Binary LC with ISET – Emulation of the Waters Alliance 2695 LC System Analyzing Analgesics. Agilent Technologies Application Note 5991-2792EN, 2013.
3. Gratzfeld-Huesgen A. Seamless instrument-to-instrument method transfer from an Agilent 1100/1200 Series LC to an Agilent 1290 Infinity LC using ISET. Agilent Technologies Application Note 5990-9113EN, 2011.
4. Agilent 1290 Infinity with ISET, User Manual G4220-90314, 2015.