Comprehensive 2D-LC Analysis of Tea (Camellia sinensis) with the Agilent 1290 Infinity II 2D-LC Solution

Význam tématu

Tea je jedním z nejrozšířenějších nápojů na světě, bohatý na biologicky aktivní látky, mezi které patří polyfenoly a purinové alkaloidy. Analytická charakterizace těchto složek je klíčová pro kontrolu kvality, studium zdravotních přínosů a ověřování autenticity produktů. Komplexní složení listů Camellia sinensis vyžaduje pokročilé separační techniky s vysokým rozlišením.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout a validovat komplexní dvoudimenzionální kapalinovou chromatografii (2D-LC) pro kvantifikaci purinových alkaloidů (kofein, theobromin) a hlavních katechinů (catechin, epicatechin, epigallocatechin galát) v zeleném a černém čaji. Metoda využívá Agilent 1290 Infinity II 2D-LC solution pro dosažení úplné separace a přesné kvantifikace analyzovaných sloučenin.

Použitá metodika a instrumentace

Pro analýzu byly připraveny standardní roztoky a extrakty čajových vzorků z acetonu a vody. Vzorky se extrahovaly trojnásobně, sloučeniny se vysušily a znovu rozpuštěly v adekvátní matrici.
Instrumentace:

• Agilent 1290 Infinity II High-Speed Pumpy
• Agilent 1290 Infinity II Multisampler s chlazením
• Agilent 1290 Infinity II Multicolumn Thermostat s 2pozicovým ventilem pro moduly 2D-LC
• Agilent 1290 Infinity II Diode Array Detektor
• Kolony ZORBAX Eclipse Plus C18 pro 1D a Poroshell 120 Bonus-RP pro 2D

Podmínky separace zahrnovaly gradientní eluce v první dimenzi s vodou a methanolem s doplňkem kyseliny trifluoroctové a ve druhé dimenzi s vodou a acetonitrilem. Modulace byla nastavena na cyklus o délce 21 sekund.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila kompletní rozlišení kofeinu, theobrominu, theofylinu a katechinů díky kombinaci dvou reverzních fází. Přesnost retence ve druhé dimenzi byla pod 2,5 % RSD a přesnost plochy pod 1 % RSD. Linearity kalibračních křivek v rozsahu 2 až 100 µg/mL dosahovala koeficientu determinace nad 0,9998. Analýza deseti vzorků potvrdila vyšší obsah epigallocatechin galátu a epicatechinu v zeleném čaji ve srovnání s černým, kde se navíc objevily vedlejší produkty oxidace.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoké rozlišení a úplná separace obtížně rozlišitelných fenolických sloučenin
• Vynikající opakovatelnost retence a ploch
• Možnost rychlého screeningu kvality a složení čajových výrobků
• Vhodné pro potravinářský průmysl, QA/QC i výzkum bioaktivních látek

Budoucí trendy a možnosti využití

Metoda 2D-LC má potenciál pro rozšíření do analýzy dalších komplexních přírodních směsí, metabolomických studií a ověřování autenticity funkčních potravin. Integrace s hmotnostní spektrometrií by dále rozšířila identifikační schopnosti a umožnila sledovat širší spektrum sloučenin.

Závěr

Vyvinutá 2D-LC metoda s Agilent 1290 Infinity II poskytuje spolehlivé a precizní stanovení klíčových alkaloidů a katechinů v čaji. Díky vysoké separační síle a reprodukovatelnosti nabízí robustní nástroj pro kontrolu kvality a vědecké studie.

Reference

1. Del Rio D et al. J Agric Food Chem 2004 52 2807-2815
2. El-Shahawi MS et al. Food Chem 2012 134 2268-2275
3. Kalili KM, de Villiers A. J Sep Sci 2010 33 853-863
4. Neilson AP et al. J Chromatogr A 2006 1132 132-140
5. Rahim AA et al. Food Chem 2014 147 262-268
6. Mizukami Y et al. J Agric Food Chem 2007 55 4957-4964
7. Scoparo CT et al. J Chromatogr A 2012 1222 29-37