Detection of Oral-Turinabol Metabolites by LC/MS Q-TOF

Význam tématu

Odhalování metabolitů Oral-Turinabolu je klíčové pro prevenci zneužívání zakázaných anabolických steroidů a ochranu integrity sportu.
Metoda LC/MS Q-TOF přináší vysokou selektivitu a citlivost, která doplňuje tradiční GC/MS přístupy a umožňuje detekci metabolitů v nízkých koncentracích i dlouho po podání.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo identifikovat potenciální biomarkery konzumace Oral-Turinabolu (dehydrochloromethyltestosteronu) metodou LC/MS Q-TOF bez předchozí enzymatické hydrolýzy.
Autoři sledovali urine vzorky zdravého dobrovolníka po jednorázové dávce 5 mg po dobu až 14 dní a navrhli struktury nových metabolitů.

Použitá metodika

Vzorky moči byly extrahovány kapalnou extrakcí při pH 9,5 pomocí tert-butylmethyletheru.
Po odpaření byl vzorek rekonstituován v roztoku vody a acetonitrilu (9:1) a injikován do chromatografu.

Použitá instrumentace

• Chromatograf Agilent 1290 Infinity LC
• Kolona Agilent Poroshell 120 EC-C18 (2,1 × 50 mm, 2,7 μm)
• Detektor Agilent 6550 Accurate-Mass Q-TOF LC/MS s iFunnel technologií
• Elektrosprayové ionizační zdroj v negativním módu, desolvační plyn dusík
• Softwarové prostředí Agilent MassHunter Workstation pro akvizici a kvalifikaci dat

Hlavní výsledky a diskuse

Bylo detekováno devět metabolitů (M1–M9) zahrnujících volné i glukuronidově vázané sloučeniny.
Dominantními metabolickými reakcemi byla hydroxylace (pozice 6, 12, 16), dihydroxylace, Wagner-Meerweinova přeuspořádání a glukuronidace.
Metabolit M2 vykázal detekci více než 14 dní po aplikaci, což naznačuje prodlouženou detekční dobu.

Přínosy a praktické využití metody

• Delší detekční okna pro kontrolu užití Oral-Turinabolu
• Vyšší citlivost a selektivita díky přesnému měření hmotnosti
• Možnost detekce nových fáze II metabolitů, které nebyly dosud popsány

Metoda se dá integrovat do rutinních dopingových protokolů na principech LC-MS/MS.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Širší validace metabolitů na různých populacích a dávkách
• Přenos na LC-MS/MS trojitý kvadrupól pro rutinní screening
• Vytvoření komplexních databází přesných hmotností a fragmentačních vzorů

Závěr

Studie potvrzuje, že LC/MS Q-TOF je vysoce efektivní pro odhalování metabolitů Oral-Turinabolu s delší detekční dobou než tradiční GC/MS.
Identifikace glukuronidových metabolitů rozšiřuje možnosti dopingové kontroly a umožňuje včasnou detekci zneužití.

Reference

• Schubert K et al Endokrinologie 1970 55 257-269
• Dürbeck HW et al J Chromatogr Sci 1983 21 405-410
• Schänzer W Donike M Anal Chim Acta 1993 275 23-48
• Sobolevsky T Rodchenkov G J Steroid Biochem 2012 128 121-127