AccQ•Tag Ultra Derivatization Kit

Význam tématu

Analýza aminokyselin je zásadní pro biochemii, proteomiku, potravinářský průmysl i klinickou diagnostiku. Prekoloidní derivatizace pomocí AccQ•Tag Ultra zvyšuje citlivost a selektivitu detekce při UPLC, zajišťuje rychlou separaci a přesnou kvantifikaci širokého spektra aminokyselin.

Cíle a přehled studie / článku

Manuál popisuje použití AccQ•Tag Ultra Derivatization Kit v kontextu UPLC Amino Acid Analysis Application Solution. Cílem je poskytnout ucelený protokol pro přípravu vzorku, derivatizaci, chromatografickou separaci a kvantitativní analýzu aminokyselin za použití UV detekce.

Použitá metodika a instrumentace

Pro derivatizaci aminokyselin se používá 6-aminochinolyl-N-hydroxysuccinimidylkarbamát (AQC) ve formě AccQ•Tag Ultra Reagent Powder, zřeďované acetonitrilem. Postup zahrnuje:

• Vyrovnání pH vzorku AccQ•Tag Ultra Borate Bufferem
• Rekonstrukci derivatizačního činidla
• Smíchání vzorku se standardy a činidlem
• Reakci při 55 °C po dobu 10 minut

Separace probíhá na kolonce Waters AccQ•Tag Ultra 2,1×100 mm, 1,7 µm pomocí elučních pufrů AccQ•Tag Ultra Eluent A a B. Detekce derivátů se realizuje UV spektrometrií. Data se vyhodnocují v softwaru Empower.

Hlavní výsledky a diskuse

Typický chromatogram ukazuje dobře rozlišené píky pro standardních 18 aminokyselin během 8 minut. Metoda poskytuje vysokou reprodukovatelnost retencí, nízkou mez detekce v řádu pmol a stabilní kvantitativní výsledky bez významných interferencí.

Přínosy a praktické využití metody

AccQ•Tag Ultra umožňuje rychlé a robustní stanovení volných aminokyselin i proteinových hydrolyzátů. Díky kompatibilitě s UPLC systémy je vhodný pro rutinní QA/QC laboratoře, výzkumné projekty i klinické aplikace, kde je vyžadována vysoká citlivost, přesnost a kapacita throughput.

Použitá instrumentace

• ACQUITY UPLC System se sloupkem AccQ•Tag Ultra 2,1×100 mm, 1,7 µm
• Empower software pro řízení systému a vyhodnocení dat
• UV detektor
• Standardní laboratorní vybavení: topné bloky, mikropipety, víčkové zkumavky

Budoucí trendy a možnosti využití

Integrace s hmotnostní spektrometrií pro zvýšenou selektivitu, automatizace vzorkování a derivatizace, vývoj multiplexních kitů pro širší spektrum bioaktivních aminokyselin a peptidů. Možný je také vývoj miniaturizovaných a mikrofluidních platforem pro zvýšení propustnosti a snížení spotřeby reagencií.

Závěr

AccQ•Tag Ultra Derivatization Kit je osvědčené řešení pro rychlou a přesnou UPLC analýzu aminokyselin. Díky jednoduchému protokolu, stabilitě kitů a kompatibilitě se standardními UPLC platformami zajišťuje vysokou kvalitu dat pro široké spektrum aplikací v analytické chemii.