Quantitative Method for Amphetamines, Phentermine, and Designer Stimulants Using an Agilent 6430 LC/MS/MS

Význam tématu

Analýza amfetaminů, fenterminu a nových stimulujících látek v biologických vzorcích je klíčová pro forenzní toxikologii, zejména v případě řízení pod vlivem návykových látek (DUID) či soudně-medicínských posudků. Metody založené na LC/MS/MS přinášejí významné zvýšení citlivosti, specificity a zkrácení doby přípravy oproti tradičním GC/MS postupům vyžadujícím derivatizaci.

Cíle a přehled studie / článku

Hlavním cílem bylo vyvinout a validovat kvantitativní LC/MS/MS metodu pro simultánní stanovení širokého spektra amfetaminů, fenterminu a populárních „designer stimulants“ ve vzorcích plné krve podle kritérií SWGTOX a pokynů Virginie Department of Forensic Science. Studie zahrnovala konstrukci kalibračního modelu, ověření přesnosti, preciznosti, citlivosti, zotavení, matrixových efektů, stability, přenosu (carryover) a integrity ředění.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky plné krve byly podrobeny kapalně–kapalné extrakci za použití nasyceného roztoku trisodného fosfátu a 1-chlorbutanu. Pro kompenzaci matrixových efektů byly využity stabilně značené izotopové interní standardy. Chromatografická separace a hmotnostní detekce v režimu MRM proběhla na systému Agilent 6430 Triple Quadrupole LC/MS s ovládacím a vyhodnocovacím softwarem MassHunter Acquisition a Quantitative Analysis.

Hlavní výsledky a diskuse

• Kalibrace: Dynamický rozsah 0,01–2,0 mg/L, většina sloučenin linearizována lineárním modelem s váhou 1/x, pro část analyzovaných komerční sloučeniny byl optimální kvadratický model s váhou 1/x. Korelační koeficient R2 > 0,985.
• Citlivost: LOD dosahovaly 0,00125–0,01 mg/L a LOQ 0,0025–0,01 mg/L pro všechny cílové látky.
• Přesnost a preciznost: Meziběhová i vnitroběhová preciznost < 13 % CV, přesnost 93–105 % při testovacích koncentracích 0,03, 0,3 a 1,5 mg/L.
• Zotavení: Extrakční výtěžnost v krvi 77–101 %, v játrech 70–89 % a v moči 78–98 %, interní standardy vykázaly podobné hodnoty.
• Matrixové efekty: Ion‐suppression a enhancement v rozsahu 64–120 %, komplikace byly korigovány pomocí izotopově značených interních standardů.
• Stabilita: Vzorky po extrakci stabilní až 7 dní při opakovaných injekcích s výkyvem signálu v mezích 80–120 % původního.
• Carryover: Žádné významné přenosy při koncentracích do 5 mg/L, standardní horní kalibrátor nastaven na 2 mg/L.
• Integrita ředění: Přesnost a preciznost do ± 20 % po ředění 1:2 až 1:20 u malých i velkých objemů vzorků, s výjimkou některých sloučenin při nejvyšších ředěních.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda zkracuje dobu přípravy vzorků, nepotřebuje derivatizaci, zvyšuje kapacitu laboratoří a spolehlivě pokrývá široké spektrum legálních i nelegálních stimulujících látek. Je vhodná pro rutinní forenzní i klinickou toxikologii, monitorování DUID případů i rozšířenou případovou praxi.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření panelu o nové psychoaktivní látky a designer drogy s využitím vysokorozlišovací MS nebo paralelních MRM režimů.
• Automatizace přípravy vzorků a integrace do plně robotizovaných linek pro vysokopropustné rutinní stanovení.
• Vývoj robustních standardů kvality a mezinárodní harmonizace validačních protokolů pro forenzní LC/MS/MS metody.
• Implementace datových přístupů pro rychlé screeningy a využití datového dolování k odhalování nových metabolických vzorců.

Závěr

Validovaná LC/MS/MS metoda na platformě Agilent 6430 Triple Quadrupole nabízí spolehlivou a výkonnou alternativu ke GC/MS postupu pro stanovení amfetaminů, fenterminu a designer stimulants v krvi. Splňuje kritéria SWGTOX, poskytuje vysokou citlivost, přesnost i preciznost a je připravena pro implementaci v forenzních laboratořích.

Reference

1. Scientific Working Group for Forensic Toxicology. Standard Practices for Method Validation in Forensic Toxicology, SWGTOX Doc. 003, Rev. 1, 2013.
2. Virginia Department of Forensic Science. Toxicology Procedures Manual, Doc. 220-D100, 2015.
3. Hudson J., Hutchings J., Wagner R. Amphetamines, Phentermine, and Designer Stimulant Quantitation Using an Agilent 6430 LC/MS/MS. Agilent Tech. App. Note 5991-5059EN, 2015.