Amphetamines, Phentermine, and Designer Stimulant Quantitation Using an Agilent 6430 LC/MS/MS

Význam tématu

V forenzní toxikologii je spolehlivá a rychlá detekce amfetaminů, feneterminu a moderních stimulancií klíčová pro vyšetřování a kontrolu zneužití drog. Tradiční metody založené na GC/MS vyžadují obsáhlou přípravu vzorku včetně extrakce a derivatizace. LC/MS/MS umožňuje zkrátit dobu analýzy a zlepšit citlivost i selektivitu měření.

Cíle a přehled studie

Metodika byla navržena pro kvantitativní stanovení 13 cílových stimulantů v krevních vzorcích. Validace proběhla podle doporučení SWGTOX a směrnic Virginské forenzní vědy. Hlavním cílem bylo dosáhnout spolehlivého rozlišení, reprodukovatelnosti a rozsahu detekce během 9minutového chromatografického běhu.

Použitá instrumentace

• Agilent 6430 Triple Quadrupole MS
• Agilent 1260 Infinity LC
• Kolona Poroshell 120 EC-C18 2.1×75 mm, 2.7 μm
• Agilent 1290 Automatic Liquid Sampler
• Zymark TurboVap pro odpařování
• Agilent MassHunter Software
• Ostatní laboratorní vybavení: pipety, centrifuga, skleněné zkumavky

Použitá metodika

Vzorky krve byly extrahovány nasyceným roztokem fosforečnanu sodného a 1-chlorbutanem. Následovalo kyselé odštěpení, odpaření při 40 °C a rekonstituce v 0.1 % kyselině mravenčí. Chromatografie probíhala gradientem vody a acetonitrilu, oba s 0.1 % kyselinou mravenčí, rychlostí 0.5 mL/min. MS detekce byla v pozitivní ESI dynamickém MRM režimu s dobou cyklu 9 minut.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila oddělení a kvantifikaci všech 13 analy­tů s ostrými špičkami a bez významného rozkladného nebo matri­cového rušení. Lineární vážené (1/x) kalibrační křivky se osvědčily pro čtyři sloučeniny, pro zbývající byly vhodné kvadratické vážené modely, všechny s koeficientem determinace R2 > 0.998. Validace dle SWGTOX zahrnovala testy linearity, přesnosti, limitů detekce, potlačení ionizace i stability vzorků, přičemž metoda splnila stanovená kritéria.

Přínosy a praktické využití metody

Nová LC/MS/MS metoda zkracuje čas přípravy vzorku, nevyžaduje derivatizaci a umožňuje rychlejší následné dávkové zpracování. Lze ji nasadit v rutinních forenzních laboratořích pro spolehlivé sledování stimulancií v krvi.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření panelu o další drogové třídy
• Vyšší automatizace a miniaturizace přípravy vzorků
• Integrace vysokého rozlišení (HRMS) pro neznámé látky
• Reálné časové monitorování expozice

Závěr

Vyvinutá metoda LC/MS/MS pro analýzu amfetaminů, feneterminu a designer stimulantů prokázala vysokou citlivost, přesnost a robustnost. Splňuje požadavky pro forenzní rutinní analýzu krevních vzorků.

Reference

1. Standard Practices for Method Validation in Forensic Toxicology, SWGTOX, 2013
2. Toxicology Procedures Manual, Virginia DFS, 2015
3. Hudson J. et al., Quantitative Method for Amphetamines…, Agilent Application Note, 2015