A Holistic Workflow for Acquisition, Processing, and Reporting Fluorescent-Labeled Glycans Using the Biopharmaceutical Platform Solution With UNIFI
Aplikace | 2016 | WatersInstrumentace
Glykanová analýza bioterapeutik je klíčová pro zajištění kvality, účinnosti a bezpečnosti léčiv. Hydrofobní interakce a variabilita glykanových konstrukcí vyžadují spolehlivou, opakovatelnou a validovatelnou metodu pro rutinní implementaci v regulovaných i vývojových laboratořích.
Cílem je demonstrovat kompletní integrovaný workflow pro přípravu, akvizici, zpracování a automatické vytváření zpráv o fluorescenčně značených glycanech (2-AB) pomocí platformy Waters Biopharmaceutical Solution s UNIFI. Studie popisuje použití HILIC UPLC FLR separace a GU kalibrace dextranovou standardní křivkou.
Vzorky N-glykanů byly enzymaticky uvolněny a označeny 2-aminobenzamidem, následně separovány na UPLC H-Class systému s BEH Glycan Amide kolonkou (130Å, 1,7 µm, 2,1 × 150 mm) při 40 °C v gradientu 50 mM amonného formiátu (pH 4,4) a acetonitrilu. Detekce fluorescencí probíhala na ACQUITY UPLC FLR detektoru. Retenční časy byly kalibrovány pomocí 2-AB Dextran Calibration Ladder a vyhodnoceny v UNIFI Scientific Information System v.1.6.
Instrumentace:
Metoda prokázala vysokou reprodukovatelnost retenčních časů (normované GU) mezi opakováními a zařízeními. UNIFI umožňuje automatizované sestavení kalibrační křivky, přiřazování GU hodnot pomocí integrované Glycobase databáze a generování reportů s kvantitativními údaji o relativní abundanci glycanu.
Celistvý software výrazně zkracuje čas analýzy, minimalizuje manuální zásahy a chyby, usnadňuje správu více systémů v síti a zajišťuje auditní stopu. Metodu lze využít v rutinním QC i vývojových laboratořích v souladu s regulačními požadavky.
Budoucí verze UNIFI (v1.6.1) integruje rozšířenou Glycobase databázi se stovkami glycanských záznamů, strukturálním popisem a exoglykozidasovými dráhami. Očekává se rozšíření workflow o hmotnostní spektrometrii a pokročilé možnosti cíleného vyhledávání.
Popsaný workflow poskytuje plně integrované řešení pro fluorescentní glykanový profil s vysokou přesností a konzistencí, podporuje rutinní aplikace bioterapeutické analytiky a zajišťuje plnou kompatibilitu s regulačními standardy.
HPLC
ZaměřeníFarmaceutická analýza
VýrobceWaters
Souhrn
Význam tématu
Glykanová analýza bioterapeutik je klíčová pro zajištění kvality, účinnosti a bezpečnosti léčiv. Hydrofobní interakce a variabilita glykanových konstrukcí vyžadují spolehlivou, opakovatelnou a validovatelnou metodu pro rutinní implementaci v regulovaných i vývojových laboratořích.
Cíle a přehled studie / článku
Cílem je demonstrovat kompletní integrovaný workflow pro přípravu, akvizici, zpracování a automatické vytváření zpráv o fluorescenčně značených glycanech (2-AB) pomocí platformy Waters Biopharmaceutical Solution s UNIFI. Studie popisuje použití HILIC UPLC FLR separace a GU kalibrace dextranovou standardní křivkou.
Použitá metodika a instrumentace
Vzorky N-glykanů byly enzymaticky uvolněny a označeny 2-aminobenzamidem, následně separovány na UPLC H-Class systému s BEH Glycan Amide kolonkou (130Å, 1,7 µm, 2,1 × 150 mm) při 40 °C v gradientu 50 mM amonného formiátu (pH 4,4) a acetonitrilu. Detekce fluorescencí probíhala na ACQUITY UPLC FLR detektoru. Retenční časy byly kalibrovány pomocí 2-AB Dextran Calibration Ladder a vyhodnoceny v UNIFI Scientific Information System v.1.6.
Instrumentace:
- ACQUITY UPLC H-Class System
- ACQUITY UPLC BEH Glycan Column
- ACQUITY UPLC FLR Detector
- UNIFI Scientific Information System
- 2-AB Dextran Calibration Ladder
- GlycoWorks Reductive Amination Kit
Hlavní výsledky a diskuse
Metoda prokázala vysokou reprodukovatelnost retenčních časů (normované GU) mezi opakováními a zařízeními. UNIFI umožňuje automatizované sestavení kalibrační křivky, přiřazování GU hodnot pomocí integrované Glycobase databáze a generování reportů s kvantitativními údaji o relativní abundanci glycanu.
Přínosy a praktické využití metody
Celistvý software výrazně zkracuje čas analýzy, minimalizuje manuální zásahy a chyby, usnadňuje správu více systémů v síti a zajišťuje auditní stopu. Metodu lze využít v rutinním QC i vývojových laboratořích v souladu s regulačními požadavky.
Budoucí trendy a možnosti využití
Budoucí verze UNIFI (v1.6.1) integruje rozšířenou Glycobase databázi se stovkami glycanských záznamů, strukturálním popisem a exoglykozidasovými dráhami. Očekává se rozšíření workflow o hmotnostní spektrometrii a pokročilé možnosti cíleného vyhledávání.
Závěr
Popsaný workflow poskytuje plně integrované řešení pro fluorescentní glykanový profil s vysokou přesností a konzistencí, podporuje rutinní aplikace bioterapeutické analytiky a zajišťuje plnou kompatibilitu s regulačními standardy.
Reference
- Campbell MP, Roylez L, Radcliffe CM, Swek RA, Rudd PM. GlycoBase and autoGU: tools for HPLC-based glycan analysis. Bioinformatics. 2008;24(9):1214-1216.
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
BIOPHARMACEUTICAL - Key Applications
2016|Waters|Příručky
BIOPHARMACEUTICAL PLATFORM SOLUTION Key Applications TABLE OF CONTENTS Biopharmaceutical Platform Solution with UNIFI: Key Applications Intact Protein MS Analysis I Peptide Mapping I Released Glycan Analysis I Bioseparations Biotherapeutic proteins – such as monoclonal antibodies (mAbs), biosimilars, and antibody drug…
Klíčová slova
unifi, unifiuplc, uplcbiopharmaceutical, biopharmaceuticalglycan, glycanacquity, acquityglycoworks, glycoworksplatform, platformglycans, glycanspeptide, peptidebiosimilar, biosimilaranalysis, analysissolution, solutionintact, intactwaters, watersinnovator
N-linked Glycan Characterization and Profiling: Combining the Power of Accurate Mass, Reference Glucose Units, and UNIFI Software for Confident Glycan Assignments
2016|Waters|Aplikace
N-linked Glycan Characterization and Profiling: Combining the Power of Accurate Mass, Reference Glucose Units, and UNIFI Software for Confident Glycan Assignments Ying Qing Yu Waters Corporation, Milford, MA, USA A P P L I C AT I O N B…
Klíčová slova
glycan, glycanuplc, uplclinked, linkedunifi, unififlr, flrcharacterization, characterizationprofiling, profilingacquity, acquityfluorescent, fluorescentwaters, waterslibrary, librarybiopharmaceutical, biopharmaceuticalbio, biobiotherapeutic, biotherapeuticassignment
Waters Application Notes - Glycans
2016|Waters|Příručky
Waters Application Notes Glycans There are a variety of complementary techniques practiced to get the complete story about a glycoprotein. Each technique varies in complexity and provides a different layer of information. Method complexity This application notebook highlights a body…
Klíčová slova
glycan, glycanrapifluor, rapifluorglycans, glycanshilic, hilicuplc, uplcacquity, acquityamide, amideglycoworks, glycoworksflr, flrreleased, releasedunifi, unifilabeled, labeledseparations, separationsglycosylation, glycosylationbeh
Released N-linked Glycan Analysis Using the Glycan Application Solution with UNIFI
2016|Waters|Aplikace
Released N-linked Glycan Analysis Using the Glycan Application Solution with UNIFI Ying Qing Yu Waters Corporation, Milford, MA, USA G OA L Comprehensive N-linked glycan analysis using the To demonstrate two fit-for-purpose glycan analysis workflows for comprehensive N-linked glycan profiling…
Klíčová slova
glycan, glycanunifi, unifirapifluor, rapifluoruplc, uplcglycoworks, glycoworksflr, flracquity, acquitysimglycan, simglycanglycans, glycanslabeling, labelingsolution, solutionlinked, linkedscientific, scientificworkflows, workflowsusing
