Bypassing LC System Passivation Requirements Using ACQUITY PREMIER with MaxPeak HPS Technology for the Recovery of a Phosphorylated Peptide

Význam tématu

Analýza proteinů a peptidů, zejména phosphorylovaných, často trpí na absorpci na kovové povrchy chromatografických systémů, což vede ke špatné obnově analyzátů a horší opakovatelnosti. Efektivní chromatografický postup bez nutnosti chemické pasivace zvyšuje výkon analýz a zkracuje dobu přípravy metod.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo porovnat tradiční LC systém s novým ACQUITY PREMIER vybaveným technologií MaxPeak HPS ve schopnosti obnovit phosphorylovaný peptid (insulin receptor, TRDIpYETDpYYRK) bez použití agresivní pasivace. Studie demonstruje, zda lze dosáhnout kompletní detekce citlivých biomolekul přímo „off the shelf“.

Použitá metodika a instrumentace

• Fáze mobilní A: 0,1 % kyselina mravenčí ve vodě; fáze B: 0,1 % kyselina mravenčí v acetonitrilu.
• Gradient od 0,5 % do 40 % fáze B za 12 minut.
• Konvenční LC systém s dedikovanou kolonkou pro peptidy versus ACQUITY PREMIER System a Peptide CSH C18 kolona (130 Å, 1,7 µm, 2,1 × 100 mm).
• Pasivace konvenčního systému: 30 % kyselina fosforečná následovaná ekvilibrací při výchozích podmínkách.

Hlavní výsledky a diskuse

• Konvenční systém bez pasivace nedetekoval phosphorylovaný peptid kvůli silné absorpci na kovové povrchy.
• Po pasivaci konvenčního systému se obnova peptidu zlepšila, avšak postup je časově náročný a vyžaduje agresivní činidla.
• ACQUITY PREMIER s technologií MaxPeak HPS obnovil všechny komponenty peptidové směsi bez předchozí pasivace.
• Opakovatelnost (peak area %RSD) se zlepšila z 6,22 % (konvenční systém) na 0,48 % (MaxPeak HPS) a průměrná plocha piku byla o 50 % větší.

Přínosy a praktické využití metody

• Odstranění potřeby chemické pasivace šetří čas a snižuje spotřebu agresivních látek.
• Zvýšená citlivost a reprodukovatelnost analýzy phosphorylovaných peptideů.
• Rychlejší zavádění analytických metod ve výzkumných i QA/QC laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření HPS povrchů v programech proteomických analýz pro širší škálu biomolekul.
• Integrace odolných povrchů do mikrofluidních a automatizovaných platforem.
• Další vývoj materiálů minimalizujících interakce s kovovými ionty a matrice účinky.

Závěr

ACQUITY PREMIER s technologií MaxPeak HPS prokázal schopnost optimalizovat obnovu phosphorylovaných peptidů bez nutnosti pasivace systému agresivními kyselinami. Tento přístup přináší efektivnější a spolehlivější metodiky v oblasti proteomiky a biopharma QA/QC.

Reference

• D. T. Gjerde, C. P. Hanna, D. Hornby, Appendix 2: System Cleaning and Passivation Treatment, DNA Chromatography, Wiley-VCH Verlag GmbH & Co., 2002.
• R. Day, Passivating Stainless Steel in HPLC Systems, Waters Lab Highlights, LAH 0376.