Automated Protein Modification Characterization of the Intact and Subunit NIST Monoclonal Antibody Reference Standard with Waters UNIFI Scientific Information System
Aplikace | 2017 | WatersInstrumentace
Charakterizace monoklonálních protilátek (mAb) na úrovni intaktního proteinu a jejich podjednotek je klíčová pro zajištění kvality, bezpečnosti a účinnosti bioterapeutik. Vysokorozlišující LC–HRMS analýza umožňuje odhalit rozdíly v hmotnosti způsobené posttranslačními modifikacemi (PTM), které mohou ovlivnit farmakokinetiku a biologickou aktivitu léčiv.
Cílem práce bylo ukázat plně automatizovaný workflow pro měření přesné hmotnosti a kvantifikaci modifikací intaktního mAb a jeho podjednotek pomocí systému Waters UNIFI řízeného hmotnostním spektrometrem Vion IMS QTof. Studijním vzorkem byl NIST mAb Referenční Standard RM 8671.
Vzorky intaktního mAb připraveny v 25 mM octanu amonném; pro analýzu podjednotek zpracovány enzymem IdeS a částečně redukovány DTT. Separace probíhala na ACQUITY UPLC H-Class Bio System s kolonkou BEH C4 při 80 °C.
Intaktní mAb:
Podjednotky:
Workflow v UNIFI výrazně snižuje potřebu manuálních zásahů při dekonvoluci a přiřazování špiček, poskytuje reprodukovatelné a validovatelné výsledky a urychluje analýzu v QC laboratořích a výzkumných centrech.
Očekává se další zlepšení citlivosti a rychlosti detekce modifikací díky rozvoji IMS technologií a pokročilé automatizace zpracování dat. Integrace vícedimenzionálních analýz (RT, m/z, intenzita, IMS drift) přispěje k detailnější charakterizaci komplexních biologik.
Představený end-to-end systém Vion IMS QTof/UNIFI nabízí robustní, automatizované řešení pro kvantitativní a kvalitativní charakterizaci intaktních mAb a jejich podjednotek. Kombinace vysokého rozlišení a workflow řízeného softwaru urychluje vývoj a kontrolu bioterapeutik.
1. Shion H., Yu Y.-Q. High-performance Vion IMS QTof for monoclonal antibody intact and subunit mass analysis; Waters Corporation, 720005906EN, 2017.
2. Fang J., Yu Y.-Q., Du M., Chen W. Peptide mapping with higher confidence using IMS QTof mass spectrometry; Waters Corporation, 720005905EN, 2017.
Iontová mobilita, LC/TOF, LC/HRMS, LC/MS, LC/MS/MS
ZaměřeníFarmaceutická analýza
VýrobceWaters
Souhrn
Význam tématu
Charakterizace monoklonálních protilátek (mAb) na úrovni intaktního proteinu a jejich podjednotek je klíčová pro zajištění kvality, bezpečnosti a účinnosti bioterapeutik. Vysokorozlišující LC–HRMS analýza umožňuje odhalit rozdíly v hmotnosti způsobené posttranslačními modifikacemi (PTM), které mohou ovlivnit farmakokinetiku a biologickou aktivitu léčiv.
Cíle a přehled studie / článku
Cílem práce bylo ukázat plně automatizovaný workflow pro měření přesné hmotnosti a kvantifikaci modifikací intaktního mAb a jeho podjednotek pomocí systému Waters UNIFI řízeného hmotnostním spektrometrem Vion IMS QTof. Studijním vzorkem byl NIST mAb Referenční Standard RM 8671.
Použitá metodika a instrumentace
Vzorky intaktního mAb připraveny v 25 mM octanu amonném; pro analýzu podjednotek zpracovány enzymem IdeS a částečně redukovány DTT. Separace probíhala na ACQUITY UPLC H-Class Bio System s kolonkou BEH C4 při 80 °C.
- Hmotnostní spektrometr: Vion IMS QTof s detektorem QuanTof2
- Softwarové řízení a zpracování: UNIFI Scientific Information System 1.8.2
- Dekonvoluce: MaxEnt 1 s manuálním nebo „Tof“ modelem šířky špiček
Hlavní výsledky a diskuse
Intaktní mAb:
- Detekováno pět nejabundantnějších glykoform při hmotnostní odchylce <10 ppm
- Potvrzené PTM: N-terminální pyroglutamin (>99 %), C-terminální odštěpení lysinu (10,5 %) a glykace (14,6 %) po odstranění N-glykanů PNGase F
Podjednotky:
- Rozdělení na LC, Fdʼ a scFc subjekty s baseline resolution
- Glykoformy scFc odpovídají intaktní analýze; LC a Fdʼ vykazují rovněž glykaci
- Relativní kvantifikace modifikací založena na MS signálu každé podjednotky
Přínosy a praktické využití metody
Workflow v UNIFI výrazně snižuje potřebu manuálních zásahů při dekonvoluci a přiřazování špiček, poskytuje reprodukovatelné a validovatelné výsledky a urychluje analýzu v QC laboratořích a výzkumných centrech.
Budoucí trendy a možnosti využití
Očekává se další zlepšení citlivosti a rychlosti detekce modifikací díky rozvoji IMS technologií a pokročilé automatizace zpracování dat. Integrace vícedimenzionálních analýz (RT, m/z, intenzita, IMS drift) přispěje k detailnější charakterizaci komplexních biologik.
Závěr
Představený end-to-end systém Vion IMS QTof/UNIFI nabízí robustní, automatizované řešení pro kvantitativní a kvalitativní charakterizaci intaktních mAb a jejich podjednotek. Kombinace vysokého rozlišení a workflow řízeného softwaru urychluje vývoj a kontrolu bioterapeutik.
Reference
1. Shion H., Yu Y.-Q. High-performance Vion IMS QTof for monoclonal antibody intact and subunit mass analysis; Waters Corporation, 720005906EN, 2017.
2. Fang J., Yu Y.-Q., Du M., Chen W. Peptide mapping with higher confidence using IMS QTof mass spectrometry; Waters Corporation, 720005905EN, 2017.
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
High-Performance Vion IMS QTof for Monoclonal Antibody Intact and Subunit Mass Analysis
2017|Waters|Aplikace
[ APPLICATION NOTE ] High-Performance Vion IMS QTof for Monoclonal Antibody Intact and Subunit Mass Analysis Henry Shion and Ying Qing Yu Waters Corporation, Milford, MA, USA APPLICATION BENEFITS ■■ ■■ Minimal tuning effort for intact protein Biotherapeutic protein products,…
Klíčová slova
intact, intactvion, vionsubunit, subunitims, imsqtof, qtofmab, mabcomposition, compositionmonoclonal, monoclonalantibody, antibodymass, massunifi, unifianalysis, analysisuplc, uplcacquity, acquityglycosylation
An Integrated LC-MS Platform for Multi-Attribute Monitoring of CQA’s of mAbs at the Subunit Level
2017|Waters|Aplikace
[ APPLICATION NOTE ] An Integrated LC-MS Platform for Multi-Attribute Monitoring of CQA’s of mAbs at the Subunit Level Nilini Ranbaduge, Henry Shion, Ying Qing Yu, and Weibin Chen Waters Corporation, Milford, MA, USA APPLICATION BENEFITS ■■ ■■ Streamlined workflows…
Klíčová slova
subunit, subunitcqa, cqascfc, scfcplatform, platformattribute, attributecqas, cqasmonitoring, monitoringmabs, mabsfucosylation, fucosylationintegrated, integratedmodifications, modificationsunifi, unifivion, vionlevel, levelglcnacs
BIOPHARMACEUTICAL - Key Applications
2016|Waters|Příručky
BIOPHARMACEUTICAL PLATFORM SOLUTION Key Applications TABLE OF CONTENTS Biopharmaceutical Platform Solution with UNIFI: Key Applications Intact Protein MS Analysis I Peptide Mapping I Released Glycan Analysis I Bioseparations Biotherapeutic proteins – such as monoclonal antibodies (mAbs), biosimilars, and antibody drug…
Klíčová slova
unifi, unifiuplc, uplcbiopharmaceutical, biopharmaceuticalglycan, glycanacquity, acquityglycoworks, glycoworksplatform, platformglycans, glycanspeptide, peptidebiosimilar, biosimilaranalysis, analysissolution, solutionintact, intactwaters, watersinnovator
Establishment of a Robust mAb Subunit Product Quality Attribute Monitoring Method Suitable for Development, Process Monitoring, and QC Release
2021|Waters|Aplikace
Application Note Establishment of a Robust mAb Subunit Product Quality Attribute Monitoring Method Suitable for Development, Process Monitoring, and QC Release Samantha Ippoliti, Ying Qing Yu, Nilini Ranbaduge, Weibin Chen Waters Corporation Abstract This application note presents a subunit MAM…
Klíčová slova
subunit, subunitmam, mamattribute, attributemab, mabclone, clonemethod, methodgained, gainedproduct, productattributes, attributesoxidation, oxidationmonitoring, monitoringresiding, residinginnovators, innovatorsdevelopability, developabilityduring
