Fast Analysis of Isoflavones in Dietary Supplements – Benefits of Mass Detection in Method Transfer and Sample Analysis

Význam tématu

Analýza isoflavonů v potravinových doplňcích je klíčová pro zajištění kvality a ověření deklarovaného obsahu biologicky aktivních látek. Tradiční LC metody s UV detekcí často narážejí na nedostatečnou selektivitu a obtížné rozlišení strukturně podobných sloučenin. Zavedení hmotnostní detekce významně zkracuje dobu vývoje a přenosu metod, minimalizuje chyby v přiřazení píků a zlepšuje spolehlivost rutinní analýzy.

Cíle a přehled studie / článku

Studie demonstruje přínos přídavné detekce pomocí single quadruple detektoru ACQUITY QDa pro rychlý přenos USP metody isoflavonů na systém UHPLC ACQUITY Arc vybavený PDA detektorem. Hlavním cílem je ukázat zjednodušení kvalitativní analýzy, identifikace koelucí a potvrzení píků ve vzorcích doplňků.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky standardů (daidzin, genistin, daidzein, genistein, glycitein, apigenin) a doplňků byly připraveny podle monografie USP s interním standardem apigeninem (4 ppm). Separace probíhala na sloupci CORTECS C18 (2,7 µm, 3×100 mm) při 30 °C a průtoku 1,08 mL/min v gradientu vody a acetonitrilu s 0,1 % kyseliny mravenčí. UV detekce na 260 nm doplňovala režim ESI+ s SIR režimy pro každý analy­t.

Použitá instrumentace

• ACQUITY Arc UHPLC System
• 2998 PDA Detector
• ACQUITY QDa Mass Detector
• CORTECS C18 Column 3,0×100 mm, 2,7 µm
• Empower 3 CDS Software

Hlavní výsledky a diskuse

Detektor QDa umožnil snadné nastavení pomocí továrních parametrů bez potřeby hlubších znalostí MS. SIR chromatogramy poskytly čisté stopy každého isoflavonu bez rušivých koelucí, což významně urychlilo identifikaci a optimalizaci separace. Včasné odhalení koeluce acetylglycitinu a malonylgenistinu předešlo možnému přenosu nevhodné metody a zkrátilo dobu vývoje. V rutinní analýze MS odhalil koeluce a pomohl jednoznačně přiřadit pík genisteinu ve složitých matricích doplňků.

Přínosy a praktické využití metody

• Zkrácení času vývoje a přenosu metody až o desítky minut na injekci
• Jednoznačné potvrzení píků a eliminace falešných přiřazení
• Zvýšená citlivost a selektivita oproti výhradně UV detekci
• Zjednodušená rutinní analýza a nižší riziko chyb v kvalitativních i kvantitativních výsledcích

Budoucí trendy a možnosti využití

Další kroky zahrnují porovnání kvantitativních výsledků MS a UV detekce pro isoflavony, rozšíření aplikace na další skupiny fytochemikálií při zachování rychlosti analýzy, integraci detektoru QDa do plně automatizovaných QC linek a využití pokročilých MS metod pro profiling metabolit v nutraceutikách.

Závěr

Implementace hmotnostní detekce pomocí ACQUITY QDa signifikantně zvyšuje efektivitu vývoje a přenosu metod pro analýzu isoflavonů v potravinových doplňcích. Metoda přináší rychlejší identifikaci, spolehlivé rozlišení složek a vyšší důvěru v rutinní výstupy bez nutnosti rozsáhlého přizpůsobení parametrů MS.

Reference

1. USP Monograph Powdered Soy Isoflavones Extract USP39–NF34 S1 [6841], The United States Pharmacopeial Convention
2. Yang J, Benvenuti M, Cleland G, Fast Analysis of Isoflavones in Dietary Supplements – USP Method Transfer on a UHPLC System with Mass Detection, Waters Application Note 720005858en; 2016
3. Yang J, Benvenuti M, Cleland G, Fast Analysis of Isoflavones in Dietary Supplements: A Comparison of Mass Detection with UV Detection, Waters Application Note