Screening Analysis of Highly Polar Doping Agents in Urine Using 2DLC/MS/MS

Význam tématu

Analýza vysoce polárních dopingových látek v moči je kritická pro udržení integrity sportovních soutěží a splnění požadavků Světové antidopingové agentury (WADA). Rychlá a citlivá detekce sloučenin jako meldonium, synefrin či octopamin umožňuje odhalit nové dopingové strategie a přispívá k objektivnímu hodnocení vzorků.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a validovat 2D HILIC LC/MS/MS metodu pro simultánní stanovení šesti vysoce polárních látek a jejich sulfo-konjugátů v moči. Studie zahrnovala přípravu vzorků, chromatografickou separaci, MRM detekci a potvrzení identity látek.

Použitá metodika a instrumentace

Pro čistění, předkoncentraci a analytickou separaci byla použita dvoudimenzionální HILIC chromatografie s rychlým přepínáním polarity v MS/MS.

• LC systém: Shimadzu Nexera X2
• Analytický sloupec: Nucleodur HILIC 100×2 mm, 1,8 μm
• Trapping sloupec: Nucleodur HILIC 20×2 mm, 3 μm
• Mobilní fáze A: voda + 5 % 200 mM octanu amonného s 0,15 % kyseliny octové
• B a C: acetonitril + 5 % stejného bufferu
• MS: Shimadzu LCMS-8060, ionizace ESI (+/–), rychlé přepínání polarity

Hlavní výsledky a diskuse

Veškeré kalibrační křivky pro analyty i jejich sulfo-metabolity vykázaly v rozsahu 1–200 ng/mL lineární odezvu s r2 >0,997. Mezi klíčová pozorování patří:

• Citlivé stanovení meldonia nad rozhodovací hladinou 100 ng/mL
• Úspěšná identifikace sulfo-konjugátů umožnila rozeznat isomery norfenefrinu a octopaminu, které měly shodné retenční časy a MRM přechody
• Rychlá analýza (ret. časy 5–8 min) bez potřeby složité extrakce

Přínosy a praktické využití metody

Metoda poskytuje robustní nástroj pro antidopingové laboratoře k simultánnímu stanovení polárních látek a jejich metabolitů v moči. Díky vysoké citlivosti a specifitě umožňuje zachytit i nízké koncentrace látek a minimalizovat falešně negativní výsledky.

Budoucí trendy a možnosti využití

Možné rozšíření metody zahrnuje:

• Doplnění dalších polárních dopingových agens a jejich konjugátů
• Automatizaci přípravy vzorků pro zvýšení laboratorní průchodnosti
• Integraci s dalšími hmotnostně-selektivními technikami pro hlubší metabolomické studie

Závěr

2D HILIC LC/MS/MS metoda nabízí rychlý, citlivý a spolehlivý přístup k detekci vysoce polárních dopingových látek a jejich metabolitů v moči. Rychlé přepínání polarity a použití trappingové fáze umožnilo efektivní separaci i potvrzení identity izomerů. Metoda je připravena k aplikaci v rutinních antidopingových laboratořích.

Reference

• Anal Bioanal. Chem. (2015), 407, 5354–5379
• Drug Test. Analysis (2015), 7, 973–979