Ultra-Low Level Analysis of Aldosterone in Plasma Using the Xevo TQ-XS for Clinical Research

Význam tématu

Aldosteron je klíčový mineralokortikoidní hormon regulující krevní tlak a elektrolytovou rovnováhu. Tradiční rozbory pomocí radioimunoanalýzy často trpí omezenou specifičností a používají nebezpečné radioizotopy. Vysoce selektivní a citlivé stanovení aldosteronu pomocí LC-MS/MS s automatizovanou přípravou vzorků nabízí bezpečnější a přesnější alternativu pro klinický výzkum.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a ověřit vysoce citlivou a selektivní metodu pro kvantifikaci nízkých fyziologických koncentrací aldosteronu v plazmě. Metoda kombinuje SPE extrakci na Oasis MAX µElution plátu s automatizací, chromatografickou separaci na ACQUITY UPLC I-Class a detekci pomocí Xevo TQ-XS MS.

Použitá metodika

• Příprava standardů a QC v odtučněné plazmě a stripované sérii, rozsah kalibrace 8–4162 pmol/L.
• Automatizovaná SPE extrakce: přidání vnitřního standardu, srážecí činidla, centrifugace, SPE na Oasis MAX µElution plátu se sekvenčním promýváním a elučním činidlem.
• Chromatografie: ACQUITY UPLC I-Class, CORTECS C18 2,7 µm, 2,1×100 mm, gradient metanol/voda s amoniovým fluoridem, doba běhu 3,5 minuty.
• Detekce: Xevo TQ-XS MS v módu MRM, přechody 359,3>189,2 pro aldosteron a 363,3>190,2 pro IS, ESI, kapilární napětí 2,75 kV.

Použitá instrumentace

• Oasis MAX µElution Plate (p/n: 186001829)
• Tecan Freedom Evo 100/4 Liquid Handler
• ACQUITY UPLC I-Class System s VanGuard Cartridge a CH modulem
• CORTECS C18 VanGuard Cartridge a kolona
• Xevo TQ-XS Tandem Quadrupole Mass Spectrometer
• Softwarové nástroje MassLynx v4.2, TargetLynx Application Manager, MassLynx LIMS Interface, Tecan File Converter

Hlavní výsledky a diskuse

• Specifičnost: žádné významné rušení ze strukturně podobných steroidů ani endogenních interferentů (±15 % bias).
• Citlivost: kvantifikace do 2,8 pmol/L s RSD <20 %, S/N >10 při 8,3 pmol/L.
• Lineární rozsah 6,7–4994 pmol/L, koeficient determinace r² >0,995.
• Precision and repeatability: QC na nízké, střední i vysoké úrovni měly RSD 2,7–6,3 %.
• Matrix effect: průměrný faktor 0,93 (range 0,84–1,03), kompenzovaný interním standardem (response ratio RSD 5,2 %).
• Shoda s EQA: Demingova regrese 0,99×–2,31, průměrný bias –3,3 %, bez významné systémové odchylky.
• Robustnost: po 672 injekcích během 48 h nárůst backpressure o 380 psi (RSD 1,3 %), plocha špičky RSD 3,6 %.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoká analytická citlivost umožňuje detekovat velmi nízké hladiny aldosteronu při malém objemu vzorku (200 µL).
• Automatizovaná příprava vzorků zvyšuje propustnost a minimalizuje lidské chyby.
• Selektivní chromatografické oddělení isobarických látek zajišťuje přesnost a přesnost měření.
• Integrovaná správa dat a LIMS rozhraní podporují stopovatelnost a kvalitu analýzy.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další rozšíření automatizovaných workflow pro klinické studie na více analyzátů současně.
• Implementace nových fází stacionární fáze a nanoLC technologií pro zlepšení citlivosti.
• Využití vyspělých MS technik (HRMS, ion mobility) pro komplexní profiling steroidního metabolomu.
• Integrace výsledků do klinických rozhodovacích procesů a personalizované medicíny.

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda pro stanovení aldosteronu v plazmě na platformě Xevo TQ-XS prokazuje vysokou selektivitu, citlivost a robustnost. Díky malému objemu vzorku a plné automatizaci je vhodná pro náročný klinický výzkum a podporuje přesné a spolehlivé kvantitativní analýzy hladin aldosteronu.