Waters VIZE 2025: Stanovení nitrosaminů v uzeninách

🎤 Přednášející: Simona Wawroszová

VIZE 2025: Stanovení nitrosaminů v uzeninách pomocí LC-MS/MS: citlivý a robustní přístup

Nitrosaminy patří mezi významné kontaminanty v masných výrobcích, zejména v uzeninách, kde vznikají reakcí dusitanů nebo dusičnanů s aminy za kyselých podmínek či při tepelném zpracování a uzení. Jejich analytické stanovení představuje výzvu kvůli nízkým koncentracím a komplexní matrici vzorků. Moderní LC-MS/MS přístupy však umožňují jejich citlivou a selektivní detekci.

Nitrosaminy v masných výrobcích: vznik a význam

Nitrosaminy vznikají při reakci dusitanů nebo dusičnanů s aminy, typicky při technologickém zpracování masa. Mezi hlavní zdroje patří fermentované a sušené salámy, slanina nebo uzené produkty. Nejčastěji sledované sloučeniny zahrnují NDMA, NDEA, NPIP, NPYR, NMOR a NDBA.

Zdravotní význam nitrosaminů souvisí s jejich schopností tvořit v organismu reaktivní intermediáty poškozující DNA, což může vést k mutacím a zvýšenému riziku nádorových onemocnění. IARC klasifikovala zpracované masné výrobky jako prokazatelně karcinogenní mimo jiné právě kvůli jejich obsahu.

Legislativní rámec

Regulace nitrosaminů se liší podle regionu. V EU není stanoven přímý limit pro jejich obsah v masných výrobcích, ale regulován je přídavek dusitanů. Naproti tomu například USA stanovují limit pro sumu těkavých nitrosaminů ve slanině (10 µg/kg). Podobné limity existují i v Kanadě nebo Číně.

LC-MS/MS přístup k analýze nitrosaminů

Nitrosaminy se v potravinách vyskytují ve velmi nízkých koncentracích, proto je nutná vysoce citlivá hmotnostní spektrometrie. Metodika využívá tandemovou MS detekci v režimu MRM, která zajišťuje selektivní kvantifikaci i konfirmaci analytů.

Příprava vzorku

Pro extrakci nitrosaminů z masné matrice je použita metoda QuEChERS, která nabízí rychlou a jednoduchou přípravu vzorků. Postup zahrnuje homogenizaci vzorku, extrakci acetonitrilem s kyselinou mravenčí, přídavek solí, centrifugaci a následné čištění pomocí dSPE.

Chromatografické a MS podmínky

Separace probíhá na koloně ACQUITY UPLC CSH Phenyl-Hexyl při teplotě 40 °C a průtoku 0,6 mL/min. Mobilní fáze tvoří voda a methanol s přídavkem kyseliny mravenčí.

MS detekce využívá ionizační zdroj APCI v pozitivním módu. Optimalizace parametrů, jako jsou kolizní energie nebo napětí kužele, je realizována v softwaru waters_connect pomocí nástrojů pro MRM optimalizaci.

Analytické parametry a validační výsledky

Metoda dosahuje velmi nízkých limitů kvantifikace v rozpouštědle i matrici. Lineární kalibrace byla potvrzena až do 50 ng/mL s korelačními koeficienty přibližně 0,999.

V testovaných vzorcích fermentovaných salámů byly dosaženy výtěžnosti v rozmezí 89–101 % a extrapolované LOQ až 0,08 µg/kg. Tyto výsledky potvrzují vhodnost metody pro rutinní potravinářské analýzy.

Závěr

Stanovení nitrosaminů v masných výrobcích vyžaduje kombinaci citlivé detekce, selektivní analýzy a efektivní přípravy vzorků. Prezentovaná LC-MS/MS metodika s využitím QuEChERS extrakce a optimalizovaného MRM režimu poskytuje robustní řešení pro monitoring těchto kontaminantů v potravinách.