Ptáme se odborníka: Lze vylepšit chromatografii bazických látek na starších HPLC systémech?

Agilent Technologies nabízí širokou škálu 4µm kolon Agilent Poroshell 120, která uspokojí všechny LC specialisty. Ať už ty, kteří rádi pracují na delších kolonách (např. 4.6 x 250 mm), nebo ty, kteří chtějí omezit tlak v systému pod 200 bar (3000 psi).

Mohu využít výhod kolon s částečně porézními částicemi na mém starším HPLC systému?

Kolony plněné částečně porézními částicemi Agilent Poroshell 120 mají (oproti kolonám s plně porézními částicemi) mnoho výhod, ale především je to rychlejší analýza a vyšší rozlišení, umožněné vyšší dělící účinností za přijatelných tlaků.

Jaké jsou výhody a nevýhody mobilních fází s vysokým pH?

Bazické sloučeniny (což je většina účinných látek v léčivech) může být náročné analyzovat na HPLC s reverzní fází, protože mají tendenci ionizovat v mobilní fázi, což vede ke chvostování píků, horšímu rozlišení a nižší kapacitě. Zvýšením pH mobilní fáze potlačíme ionizaci bazických látek, ale tento přístup může způsobit problémy se zkrácením životnosti kolon díky rozpouštění křemičitých částic v mobilní fázi s pH nad 7-8.

Existuje nějaké řešení, které by zajistilo vyšší stabilitu kolon?

Ano, Agilent vyvinul patentovanou organickou modifikaci částečně porézních částic. Kolony s touto modifikovanou fází se prodávají pod názvem Agilent Poroshell HPH-C18 a Agilent Poroshell HPH-C8. Jsou určeny pro pH od 3,0 do 11,0 a jsou dostupné jak ve velikosti částic 2,7 tak 4,0 µm.

Jaké výsledky mohu u těchto kolon očekávat?

Na chromatogramu (viz Obrázek 1.) je vidět vynikající separace bazických látek pomocí kolony Poroshell HPH-C18 2.1 x 50 mm, 4 µm v mobilní fázi pH 10. Bylo provedeno více než 2000 nástřiků a kolona nevykazuje žádné známky degradace. Kolony Agilent Poroshell HPH-C18 a Poroshell HPH-C8 4 µm v sobě kombinují výhody kratších retenčních časů, vysokého rozlišení a schopnosti poskytovat pěkné chromatografické záznamy i pro bazické sloučeniny. Tuto kombinaci vlastností ocení jistě všichni uživatelé HPLC.

Labicom: Obrázek 1. Analýza bazických látek na koloně Agilent Poroshell HPH-C18 2.1 x 50 mm, 4 µm

Podrobnější popis Obrázku 1. Analýza bazických látek na koloně Agilent Poroshell HPH-C18 2.1 x 50 mm, 4 µm. Kolona je dlouhodobě stabilní při pH 10 i po 2 tisících nástřiků (na obrázku chromatogramy nástřiků č. 5, 501, 1500 a 2000). 1. 2-Hydroxy-5 methyl-benzaldehyde 2. 4-Chloro-cinnamic acid 3. Acetophenone 4. Quinine sulfate 5. Nortriptyline 6. Hexanophenone 7. Amitriptyline. Mobilní fáze: A: acetonitril; B: uhličitan amonný, 10 mM, pH 10, gradient 5%B 95%B 5%B (celkový čas 7 min). Teplota 25 °C, průtok 0.4 ml/min, detektor UV 220 nm.

Kolony Agilent Poroshell 120: rychlejší analýzy s vyšším rozlišením

Kolony Poroshell 120 poskytují robustní separaci s vysokým rozlišením v rozsahu tlaků běžného HPLC systému. Jsou dostupné ve velikosti částic 2,7 a 4 µm, a lze si vybrat z dvanácti různých fází, které chemicky navazují na technologii ZORBAX, takže transfer metod nebo vývoj nových metod je velice snadný a rychlý.

• Agilent nyní nabízí až 19 různých fází kolon Poroshell 120.

Přehled nejnovější literatury pro kolony Poroshell 120 v knihovně LabRulezLCMS

• A Gradient USP Method Modernization Using Agilent InfinityLab Poroshell 120 Aq-C18 (Aplikace | 2023)

• Modernizing the Insulin USP Monograph HPLC Method for Assay and Related Compounds (Aplikace | 2023)

• Analysis of Traditional Chinese Medicine Formula Granules for Quality Control (Aplikace | 2023)

• Fat- and Water-Soluble Vitamin Analysis in Foods and Supplements (Consumable Workflow Ordering Guide) (Příručky | 2023)

• Easy Column Screening for Lipid Nanoparticle Component Analysis (Aplikace | 2023)

• Rapid Determination of 10 α-Hydroxy Acids (Aplikace | 2023)

• Column selection for preparative HPLC (Prezentace | 2023)

• Reversed-Phase for Biomolecules: From Column Selection to Troubleshooting (Prezentace | 2023)

• Mastering HILIC-Z Separation for Polar Analytes (Aplikace | 2023)