Waters MaxPeak PREMIER komplexní řešení (VIZE 2021)
Waters Corporation: Waters MaxPeak PREMIER komplexní řešení (VIZE 2021)
Ztráta analytů v chromatografii
- vazba analytů na povrchy
👉 Pozvánka, registrace a předběžný program semináře Waters VIZE 2022 dne 22. listopadu 2022
Nespecifická adsorpce, nespecifické vazebné interakce
- Nežádoucí interakce nebo adsorpce analytů
- Molekuly mají tendenci ulpívat na površích
- Nejčastěji příčinou jsou hydrofobní a elektrostatické interakce
Potlačení ztrát ze známých interakcí
- Zamezení interakcí analytů s povrchy
- Ovlivnění prostředí tak, aby k interakcím nedocházelo
Waters Corporation: Waters MaxPeak PREMIER komplexní řešení (VIZE 2021)
Nejčastější postupy pro potlačení nežádoucích interakcí
1. Pasivace povrchu kyselinami
Odstraňuje volné ionty kovů z povrchů
- Časově náročné
- Silné kyseliny
- Nestabilní, nutno opakovat
2. Pasivace povrchu v zorkem nebo matricí
Analyt nebo matrice pokryje reaktivní povrch
- Časově náročné
- Nestabilní, nutno opakovat
3. Kolony PEEKové nebo nerezové s PEEKovým povrchem
Nahrazení kovového materiálu inertním materiálem
- PEEK sám o sobě neodolá vysokým tlakům
- PEEKové výrobky mají vyšší rozměrovou variabilitu, nižší propustnost a nejsou kompatibilní s některými rozpouštědly
4. Ti v kolonách nebo v některých součástkách
Nefunguje. Ti je kov.
- Ztráta analytu
5. Pokrytí povrchu
Pokrytí povrchu kovu např. vrstvou silikátu apod.
- MS bleeding a další problémy
- Tento postup ani nebyl designován pro LC a LC/MS aplikace
6. Aditiva v mobilní fázi
Zamezení adsorpce tvorbou chelátů s přítomnými kovy
- Ionizační suprese a další neznámé efekty
- Trvalé používání
- Možné problémy s rozpustností
Interakce s kovy?
- řešení: MaxPeak High Performance Surfaces (HPS)
U standardních LC systémů dochází k adsorpci analytů citlivých na kovy na vnitřní kovové povrchy.
Waters Corporation: Standardní HPLC systémy
Waters MAXPEAK High Performance Surface (HPS) je navržen tak, aby interakce s těmito povrchy byly co nejmenší.
Waters Corporation: Waters MAXPEAK HPS systémy
Analyty interagující s kovy
MaxPeak High Performance Surfaces jako řešení pro analýzy analytů citlivých na kovy RP a HILIC aplikace.
Analyty
- Organické kyseliny
- Organofosfáty
- Oligonukleotidy
- Fosfopeptidy
- Kyselé glykany
- Fosfolipidy
Waters Corporation - Waters MaxPeak HPS.webp
Aplikace
- Biofarmaceutické
- Farmaceutické
- Potraviny/ ŽP
- Chemické materiály
- Biomedicínský výzkum
Waters PREMIER řešení
- Waters ACQUITY PREMIER System
- Waters Arc Premier System
- Waters Atlantis Premier BEH Z-HILIC kolony
- Waters Acquity Premier UPLC kolony
- Waters Premier SEC kolony
- Waters QuanRecovery vialky a platíčka
Waters Corporation: Waters PREMIER řešení od spotřebního materiálu, přes kolony až k HPLC systémům
Nejuniverzálnější platforma pro chromatografii
- Bez úprav ihned k použití
- Není potřeba provádět pasivaci
- Lepší citlivost a opakovatelnost
Waters Corporation: Komplexní řešení a příklady analýz ACQUITY PREMIER
ACQUITY PREMIER řešení, příklady analýz
Jeden den v životě analytika při vývoji metody.
Projekt: Mám molekulu, pro kterou potřebuji vyvinout analytickou metodu…
1. krok: Začnu s oblíbenou kombinací metoda / kolona / mobilní fáze
- Perfektní den! Metoda funguje perfektně a nepotřebuje žádnou modifikaci
- Dobrý den. Metoda dává slibné výsledky, ale je potřeba ji trochu doupravit
- Den jako zlý sen. Nevidím analyty, dokonce i když bych je určitě měl vidět
Waters Corporation: Mix analytů (malé molekuly)
Waters Corporation: Mix analytů (malé molekuly) - standardní vs. PREMIER kolony
Lepší tvar píků : užší píky & menší chvostování
Waters Corporation: Příklady plochy píku malých molekul (n=134) - PREMIER kolony vs. standardní kolony
Waters Corporation: Vybrané malé molekuly - plochy píků
Waters Corporation: ACQUITY PREMIER kolona vs. standardní kolona - Separace oligonukleotidů bez kondicionace
Vylepšení chromatografie
Kde je zřetelný benefit?
- Analyty citlivé na kovy, např. fosforylované sloučeniny a slabé kyseliny
- Molekuly náchylné k interakcím s povrchy
- Ztráty vzorku / špatné recovery / tailing píků
- Často vyžadující přidání aditiv do mobilní fáze
- Metody vyžadující pasivaci systému / kondicionaci
- Někdy se problém nedá předvídat! Může se stát, že ani nevíme, že něco nevidíme…
Příklady aplikací
Popisované v přednášce a dostupné v kompletní pdf prezentaci MaxPeak PREMIER komplexní řešení
- Dexametazon fosforečnan sodný syntetický glukokortikoid
- ACQUITY PREMIER vs. standardní LC systém
- Plocha píku
- %RSD
- Plocha píku: Organické kyseliny, kyselina citronová
- Plocha píku: AMP/ATP
- Plocha píků: Vitamíny skupiny B
- Vitamín B, energetické nápoje
Co zvýší efektivitu při vývoji metody?
- Jistota, že nemizí klíčové analyty
- Postupy bez nutnosti pasivace a používání aditiv
- Snížení variability vzorků a ztráty analytů kvůli interakcím s povrchy
- Okamžitý výkon, na který je spolehnutí při každém nástřiku
Waters Corporation: HPLC řešení Waters
Analytické LC systémy
Arc Premier systém
UHPLC s kontrolou rizika pro analyty citlivé na kovy
- Max tlak: 9 500 psi
- Průtoky: 0 - 5 ml/min
Čerpadla
- Binární nebo kvartérní
- Gradient SmartStart
- 0.005” ID kapiláry
- AutoBlend Plus (QSM)
Detektory: UV/VIS, PDA , FLR
Autosampler
- Flow through needle design
- Velmi nízký carryover
- 4 - 40 °C
- až 480 x 2ml vialek
- Gradient SmartStart
Vývoj metod
- Až 6 x 15cm kolon
- 4 - 90 °C
Kontrola rizika pro analyty citlivé na kovy: MAXPEAK Premier
Software
Hmotnostní detekce
- Single Quad (QDa ,SQD2)
- Tandem Quad (TQ S micro & Cronos)
Kvalifikace systému
Waters Corporation: Arc Premier a ACQUITY Premier UHPLC systém
ACQUITY Premier systém
Velký pokrok v LC separacích.
- Max tlak: 15 000 psi
- Průtoky: 0 - 2 ml/min
Čerpadla
- Binární nebo kvartérní
- 0.004” ID kapiláry
- AutoBlend Plus (QSM)
Detektory: ACQUITY TUV, PDAeλ , FLR
Autosampler
- Flow through needle design
- Velmi nízký carryover
- 4 - 40 °C
- až 480 x 2ml vialek
- Gradient SmartStart
Vývoj metod
- Až 6 x 15cm kolon
- 4 - 90 °C
Kontrola rizika pro analyty citlivé na kovy: MAXPEAK Premier
Software
Hmotnostní detekce
- Single Quad (QDa ,SQD2)
- Tandem Quad (Xevo TQ S/XS)
- Time of flight (Xevo G2 XS)
- Ion Mobility (Synapt , SELECT SERIES)
Kvalifikace systému
Acquity H-Class PLUS Bio vs. Acquity Premier
- SEC (Size Exclusion Chromatography)
Waters Corporation: Acquity H-Class PLUS Bio vs. Acquity Premier: SEC (Size Exclusion Chromatography)
Acquity H-Class PLUS Bio vs. Acquity Premier
- IEC (Ion Exchange Chromatography)
Waters Corporation: Acquity H-Class PLUS Bio vs. Acquity Premier: IEC (Ion Exchange Chromatography)
Acquity H-Class PLUS Bio vs. Acquity Premier
- HIC (Hydrophobic Interaction Chromatography)
Waters Corporation: Acquity H-Class PLUS Bio vs. Acquity Premier: HIC (Hydrophobic Interaction Chromatography)
Acquity H-Class PLUS Bio vs. Acquity Premier
- oligonukleotidy
Waters Corporation: Acquity H-Class PLUS Bio vs. Acquity Premier: oligonukleotidy
Nejuniverzálnější platforma pro chromatografii
Výhody HPS ( High Performance Surfaces) od vialky, přes kolonu až po LC systém, bez nespecifických interakcí analyt/kovový povrch
- Lepší reprodukovatelnost a opakovatelnost, konzistentní a spolehlivé výsledky
- Lepší recovery redukcí variability a ztrát způsobených interakcí s povrchy
- Rychlejší a přesnější integrace chromatogramů
- Menší variabilita mezi systémy
- Snadnější a rychlejší vývoj metod
- Bez kondicionace zpracování více vzorků snadněji a rychleji
- Přímá náhrada BioLC systémů
Kolony pro malé molekuly a bio-separace
- Precizní chemie částice a povrchy
Waters Corporation: HPLC a UHPLC kolony pro malé molekuly a bio-separace
BEH Technology
-
Excelentní pH stabilita
-
Všestrannost co do použití mobilních fází a rozsahu teplot
- Atlantis PREMIER BEH C18 AX
- ACQUITY PREMIER BEH C18
- ACQUITY PREMIER Peptide BEH 130Å C18
- ACQUITY PREMIER Peptide BEH 300Å C18
- ACQUITY PREMIER Oligonucleotide BEH 130Å C18
CSH Technology
-
Vynikající „mas loading
-
Excelentní tvar píků pro bazické analyty
- ACQUITY PREMIER CSH C18
- ACQUITY PREMIER CSH Phenyl Hexyl
- ACQUITY PREMIER Peptide CSH C18
HSS Technology
-
Maximální retence
-
Pro polární i nepolární molekuly
- ACQUITY PREMIER HSS T3
- ACQUITY PREMIER Peptide HSS T3
[QuanRecovery vialky a platíčka s označením MaxPeak High Performance Surfaces (HPS)](Waters QuanRecovery vialky a platíčka)
- Poprvé použito označení MaxPeak HPS
- Snižuje ztráty analytů v důsledku nespecifických vazeb způsobených hydrofobními interakcemi
- hydrofilní modifikace PP
- Lepší recovery , citlivost a opakovatelnost pro analýzy biomolekul
Waters Corporation: Komplexní řešení MaxPeak High Performance Surfaces
Přehled apliakčních listů a literatury pro technologii Waters Premier HPS v knihovně LabRulezLCMS
Celkově dostupných více než 200 relevantních dokumentů a z toho aplikačně zaměřených:
- Farmaceutická analýza (79)
- Klinická analýza (38)
- Lipidomika (15)
- Metabolomika (3)
- Potraviny a zemědělství (16)
- Proteomika (30)
- Životní prostředí (3)
