CARRYOVER MITIGATION USING NEEDLE WASH SOLVENT CHEMISTRY AND AUTOSAMPLER FEATURES OF A UPLC-MS SYSTEM

Význam tématu

Vysoká citlivost moderních LC–MS metod vyžaduje účinnou eliminaci carryover, aby byla zachována přesnost a spolehlivost analýz stopových množství látek.

Cíle a přehled studie / článku

Studie si klade za cíl kvantifikovat a minimalizovat carryover modelové sloučeniny granisetronu HCl při použití systému ACQUITY UPLC H-Class PLUS s QDa detektorem. Zkoumá vliv složení oplachového solventu jehly a režimu oplachu na úroveň zbytkového signálu.

Použitá instrumentace

• UPLC systém: ACQUITY UPLC H-Class PLUS se vzorkovačem FTN-PLUS
• Detektor: ACQUITY QDa Mass Detector s ACQUITY Diverter Valve
• Kolona: UPLC HSS T3, 1,8 µm, 3,0×50 mm s aktivním předohřevem
• Software: Empower 3 FR3 Hotfix 1

Použitá metodika

• Příprava kalibrace: tři body (2, 5, 10 pg na kolonu), rozsah 0,0002–0,001 % výchozí výzvy
• Diluent: 85:15 voda:acetonitril
• Mobilní fáze: A – 0,1 % kyselina mravenčí ve vodě, B – 0,1 % kyselina mravenčí v acetonitrilu, isokrat 80:20
• Parametry běhu: injekční objem 1 µl, průtok 0,9 ml/min, teplota kolony 35 °C, doba běhu 3 minuty
• Jehličkový oplach: solventy voda:acetonitril (90:10, 50:50), voda:methanol (90:10, 50:50), 100 % acetonitril, 100 % methanol
• Režimy oplachu: 6 s po injekci; 6 s před + po injekci; 12 s před + po injekci
• Pro zamezení nasycení QDa detektoru diverter přepíná tok silné výzvy na odpad

Hlavní výsledky a diskuse

• Nejnižší carryover bylo dosaženo při oplachu 50:50 voda/acetonitril; vodné oplachy obecně překonaly čisté organické solventy.
• 100 % methanol vykázal vyšší zbytkový signál než 100 % acetonitril, což odpovídá lepší rozpustnosti granisetronu v methanolu.
• Prodloužený oplach z 6 s na 12 s před a po injekci snížil carryover až třikrát.
• Oddělené obvody pro mobilní fázi a oplachový solvent eliminují vzájemnou kontaminaci.

Přínosy a praktické využití metody

Optimalizovaný oplach jehly zvyšuje spolehlivost nízkokoncentračních měření v QA/QC a farmaceutickém výzkumu. Flexibilní nastavení oplachu umožňuje přizpůsobit protokol specifickým vlastnostem analyzovaných sloučenin a zkrátit dobu cyklu bez ztráty kvality dat.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozvoj adaptivních režimů oplachu založených na vlastnostech analyzátů a integrace inteligentních algoritmů pro automatickou volbu optimálního solventu a doby oplachu. Nové materiály jehel a design vzorkovačů mohou dále redukovat carryover i pro velmi lepkavé nebo nízkomolekulární látky.

Závěr

Studie potvrzuje, že volba vhodné chemie oplachového solventu a optimalizace jeho režimů jsou klíčové pro minimalizaci carryover v UPLC–MS. Kombinace 50:50 vody/acetonitrilu a prodlouženého oplachu významně zlepšila spolehlivost kvantifikace granisetronu HCl.

Reference

1. National Center for Biotechnology Information. PubChem Compound Database; CID=5284566.
2. ACQUITY Diverter Valve Configuration 715005336 Rev. A. January 2017.
3. Dolan J. Autosampler carryover. LCGC Europe 19(10):522–529.
4. Dolan J.; Cooley L. Reproducibility and Carryover – A Case Study. LCGC 19(3):290–296.
5. ACQUITY UPLC Sample Manager-Flow Through Needle PLUS Series Overview and Maintenance Guide 715005708 Rev. A. March 2018.
6. ACQUITY UPLC H-Class, H-Class Bio, and I-Class Series Solvent Considerations 715005742 Rev. B. June 2018.
7. O’Neil M. J. The Merck Index: 14th ed.; Merck, 2006; pp 782–783.
8. Waters ACQUITY UPLC H-Class Series System Guide 715005702EN. April 2018.
9. Waters ACQUITY UPLC H-Class PLUS System Specifications 720006160EN. April 2018.
10. ACQUITY QDa Detector Overview and Maintenance Guide 715003956 Rev. F. June 2017.
11. Dlugasch A.; Simeone J.; McConville P. Alliance Carryover Performance Part 1. Waters Application Note 720006386EN. 2018.
12. Dlugasch A.; Simeone J.; McConville P. Alliance Carryover Performance Part 2. Waters Application Note 720006389EN. 2018.
13. DesJardins C.; McConville P. Carryover Mitigation Using Autosampler Features of a LC UV/MS System. HPLC2018 poster.