Efficiency of Biological Fluid Matrix Removal Using Agilent Captiva EMR— Lipid Cleanup

Význam tématu

Biologické vzorky, zejména krevní plazma a sérum, obsahují fosfolipidy, které významně narušují elektrosprejovou ionizaci (ESI) v hmotnostní spektrometrii. Tyto matrixové interferenty potlačují signál analytů a zkracují životnost chromatografických kolon. Efektivní odstranění fosfolipidů před analýzou je proto klíčové pro spolehlivou kvantifikaci v bioanalytice.

Cíle a přehled studie

Studie hodnotí novou technologii Agilent Captiva Enhanced Matrix Removal—Lipid (EMR—Lipid) ve formátu SPE cartridgí a 96-well desek. Hlavním cílem bylo porovnat účinnost odstranění fosfolipidů z různých biologických tekutin (lidská plazma s různými antikoagulanty, sérum, CSF a živočišné plazmy) s konkurenčními produkty a ověřit, zda EMR—Lipid dosahuje >99 % odstranění bez ztráty analytů.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika:

• In situ precipitace proteinů přidáním 1 % kyseliny mravenčí v acetonitrilu (ACN) k vzorku v poměru 3:1–5:1.
• Průtokové čištění přes EMR—Lipid sorbent s kontrolovaným vakuem (~1 kapka za 3–5 s), aby nedocházelo k ucpávání.
• Sběr eluátu, vysušení na proudě dusíku nebo v CentriVap a rekonstituce v 200 µl 10:90 ACN/voda s 0,1 % FA.

Použitá instrumentace:

• UHPLC Agilent 1290 Infinity (G4220A, G4226A, G131C)
• Agilent 6490 Triple Quadrupole LC/MS s JetStream iFunnel ESI
• Centra CL3R a Eppendorf centrifugy, Multitube vortexer, pipety a ViaFlo 96 liquid handler
• Captiva EMR—Lipid cartridge (1 ml) a 96-well plate, CentriVap a TurboVap koncentrátory

Hlavní výsledky a diskuse

• EMR—Lipid odstranil >99 % fosfolipidů ve všech testovaných vzorcích (lidská plazma s EDTA, heparinem či citrátem, sérum, CSF, živočišné plazmy).
• Gravimetrické stanovení ukázalo nejnižší hmotnost zbytkového matrice oproti jiným metodám.
• Eluáty byly čiré, průtok probíhal bez ucpávání při nízkém vakuu, což zajišťuje opakovatelnost a vysokou propustnost.
• Srovnávací testy pěti konkurentních produktů potvrdily srovnatelnou nebo lepší účinnost, snazší obsluhu a nižší riziko ucpávání.

Přínosy a praktické využití metody

• Zvýšená kvalita dat díky minimalizaci iontového potlačení v LC/MS/MS.
• Prodloužená životnost LC kolony a nižší riziko kontaminace MS zdroje.
• Rychlý a snadno automatizovatelný postup vhodný pro vysokopropustné klinické a farmaceutické laboratoře.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace EMR—Lipid do plně automatizovaných platforem pro bioanalytiku.
• Rozšíření aplikace na komplexní potravinové, environmentální a farmaceutické vzorky s vysokým obsahem lipidů.
• Další optimalizace sorbentu pro selektivní odstranění dalších matricových interferentů nad rámec fosfolipidů.

Závěr

Agilent Captiva EMR—Lipid nabízí vysoce selektivní a robustní způsob odstranění fosfolipidů z biologických tekutin bez ztráty analytů. S >99 % účinností, bezproblémovým průtokem a čistými eluáty zvyšuje spolehlivost a reprodukovatelnost LC/MS/MS metod v bioanalytických aplikacích.

Reference

1. Chambers E. et al. Systematic and comprehensive strategy for reducing matrix effects in LC/MS/MS analyses. J. Chromatogr. B, 2007.
2. Matuszewski B.K. et al. Strategies for the assessment of matrix effect in quantitative bioanalytical methods based on HPLC-MS/MS. Anal. Chem., 2003.
3. Little J.L. et al. LC-MS/MS method development for drug metabolism studies: Examining lipid matrix ionization effects in plasma. J. Chromatogr. B, 2006.
4. Lehotay S.J. et al. Use of buffering and other means to improve results of problematic pesticides in a fast and easy method for residue analysis of fruits and vegetables. J. AOAC Int., 2005.
5. Janusch F. et al. Evaluation and subsequent minimization of matrix effects caused by phospholipids in LC-MS analysis of biological samples. Bioanalysis, 2013.
6. Korfmacher W.A. Using Mass Spectrometry for Drug Metabolism Studies, 2004.