Analytical Development of a Four‑Stream Multiplexed LC/MS Method for the Simultaneous Determination of SDMA and ADMA

Význam tématu

Biomarkery ADMA a SDMA patří mezi klíčové indikátory kardiovaskulární dysfunkce a metabolismu dusíku. Rychlá a spolehlivá analýza těchto sloučenin je zásadní pro klinické i výzkumné laboratoře, které čelí rostoucímu počtu vzorků a požadavkům na přesnost a nákladovou efektivitu.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout a validovat čtyřkanálovou LC/MS/MS metodu pro simultánní stanovení asymetrického (ADMA) a symetrického dimethylargininu (SDMA) s využitím systému Agilent StreamSelect. Metoda byla optimalizována z hlediska linearity, přesnosti a robustnosti napříč všemi čtyřmi chromatografickými proudy.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky lidské plazmy byly připraveny precipitací proteinů methanolem obsahujícím těžce značený interní standard ADMA-d6. Separace probíhala na kolóně Phenomenex Kinetix 2.6 µm (2.1×50 mm) s isokratickou mobilní fází (A: voda + 0.005 % HFBA, B: methanol + 0.005 % HFBA) při průtoku 0.4 mL/min po dobu 5 minut. Analýzy byly provedeny na Agilent 6490 triple kvadrupólovém hmotovém spektrometru v pozitivním ionizačním režimu s MRM přechody pro kvalitativní i kvantitativní signály. Systém zahrnoval čtyři HPLC moduly Agilent 1260 Infinity, autosampler HTC-PAL se čtyřmi porty a StreamSelect rozdělovací ventil.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala lineární rozsah 10–500 ng/mL s koeficienty determinace R² > 0.9997. Intrabatch imprecision byla nižší než 1.7 % (ADMA) a 2.4 % (SDMA), interbatch imprecision pod 3.0 %. Bias nepřesáhl 3.9 % napříč testovanými koncentracemi. Výkon jednotlivých proudu byl téměř identický a celková chybovost zůstala pod stanovenými limity pro ADMA (7.5–400 ng/mL) a SDMA (5–400 ng/mL). Data potvrdila, že multiplexní provoz nezhoršuje analytickou kvalitu.

Přínosy a praktické využití metody

Implementace čtyřkanálového multiplexu umožňuje až čtyřnásobné zvýšení kapacity analýz bez ztráty citlivosti a přesnosti. Metoda je vhodná pro klinické laboratoře, farmakokinetické studie i průmyslovou QA/QC, kde zkracuje dobu analýzy a zvyšuje efektivitu workflow.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může zahrnovat rozšíření multiplexu o další biomarkery, plnou automatizaci přípravy vzorků a integraci s robotickými systémy. Potenciál spočívá také v adaptaci na vysokokapacitní screening a v nasazení v sítích klinické diagnostiky pro kontinuální sledování metabolitů.

Závěr

Vyvinutá čtyřkanálová LC/MS/MS metoda pro simultánní stanovení ADMA a SDMA úspěšně splňuje požadavky na linearitu, přesnost a robustnost v režimu vysoké propustnosti, čímž přináší významné zrychlení a spolehlivost analýz v klinické i průmyslové praxi.

Reference

1. Haiqing Ding, Cory Bystrom. Analytical Development of a Four-Stream Multiplexed LC/MS Method for the Simultaneous Determination of SDMA and ADMA. Agilent Technologies Application Note, 2018.