A Method of Simultaneous Analysis for 196 Lipid Mediators and Related Compounds Using Triple Quadrupole LC/MS/MS

Význam tématu

Lipidové mediátory představují klíčové signální molekuly v organismu s rolí v zánětlivých procesech, imunitních reakcích, alergiích a trombóze.

Cíle a přehled studie

Cílem je popsat novou komplexní metodu simultánní analýzy 196 lipidových mediátorů a příbuzných sloučenin pomocí vysokorychlostního triple kvadrupólového LC-MS/MS. Metoda zahrnuje celkem 214 sloučenin, včetně 18 vnitřních standardů, a využívá optimalizované MRM přechody s potvrzovacími tranzicemi pro přesnou identifikaci.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda kombinuje chromatografii na Phenomenex Kinetex C8 kolonce (2,1×150 mm, 2,6 μm) s gradientem formamidová voda – acetonitril a tokem 0,4 ml/min. Ionizace probíhá ESI v positive/negative módu. Použitá instrumentace:

• LCMS-8060 triple kvadrupólový hmotnostní spektrometr
• HPLC kolonka Phenomenex Kinetex C8
• SPE extrakce vzorku lidské plazmy
• Retention Time Correcting Tool pro korekci posunů retence

Hlavní výsledky a diskuse

MRM optimalizace a retence byly zajištěny pro 214 sloučenin, z toho 196 cílových a 18 interních standardů. Uživatelé mohou zadat naměřené doby z interních standardů do korekčního nástroje, který upraví predikované retence pro všechny analyty s přesností v řádu 0,005 minuty. Příklad analýzy standardní směsi prokázal shodu retencí do 0,3 s. V testu lidské plazmy bylo identifikováno a kvantifikováno 66 lipidových mediátorů z objemu vzorku 30 μl.

Přínosy a praktické využití metody

• Komplexní přehled 196 lipidových mediátorů a jejich metabolitů v jediném běhu
• Vysoká citlivost a reprodukovatelnost díky optimalizovaným MRM tranzicím
• Užitečné nástroje pro korekci retence zajišťují spolehlivou identifikaci isomerů
• Možnost analýzy stopových koncentrací ve složitých biologických matricích

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření balíčku o nové mediátory a lipidové dráhy. Dalším směrem je automatizace zpracování dat a integrace se systémy pro klinický výzkum. Vývoj nových kolon a ionizačních technik může dále zvýšit rozlišovací schopnost a citlivost.

Závěr

Popsaná metodika představuje robustní platformu pro simultánní analýzu rozsáhlé škály lipidových mediátorů za vysoké rychlosti a citlivosti. Retenční korekce zvyšuje přesnost identifikace a umožňuje aplikaci v klinické a biochemické praxi.

Reference

• Shimadzu Corporation Application Note LAAN-A-LM-E152, First Edition Feb. 2019