High Sensitivity Analysis of Aldosterone in Human Serum Using LCMS™-8060NX

Význam tématu

Aldosteron je klíčový mineralokortikoid produkovaný v kůře nadledvin, podílející se na regulaci elektrolytové a objemové homeostázy a krevního tlaku. Přesné stanovení jeho hladiny v séru je kritické pro diagnostiku onemocnění, jako je primární hyperaldosteronismus či renální komplikace.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo demonstrovat vysokosenzitivní kvantitativní analýzu aldosteronu v lidském séru pomocí triple kvadrupolového hmotnostního spektrometru LCMS-8060NX. Práce ukazuje linearitu, reprodukovatelnost a přesnost metody ve širokém dynamickém rozsahu.

Použitá instrumentace

• HPLC: systém Nexera X3 se sloupcem Shim-pack Scepter C18-120 (50×2,1 mm, 1,9 μm).
• Mobilní fáze: A) 0,05 mM NH4F ve vodě; B) methanol; gradientní eluce, 0,3 mL/min, injekce 25 μL.
• MS: LCMS-8060NX, ESI (pozitivní mód), MRM; rozhraní 1 kV; IonFocus 3,5 kV; třecí plyny: nebulizační 3,0 L/min, sušící 10,0 L/min, vyhřívací 5,0 L/min; teploty DL 250 °C, blok 300 °C, interface 400 °C.

Použitá metodika

Standardní roztoky aldosteronu (0,5–10000 pg/mL) byly připraveny ředěním v 50% methanolu. Pro vzorky se steroid-volná lidská sérum obohatila 1 pg/mL aldosteronu, přidaly se vnitřní standardy, extrahovalo se hexan-ethylacetát (9:1), centrifugovalo, odpařilo organické složky a resuspendovalo v 50% methanolu.

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační křivka ukázala v rozsahu 0,5–10000 pg/mL vynikající linearitu (R2 = 0,9998) a %RSD 3,96 % při nejnižším kvantifikačním limitu. Přesnost jednotlivých bodů kalibrace se pohybovala mezi 95,6–109,8 %. Měření spikovaných sérových vzorků (1 pg/mL) přineslo průměrnou hodnotu 1,06 pg/mL (n=3), což potvrzuje vhodnost metody pro reálné vzorky.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoká citlivost a selektivita díky MRM režimu eliminuje křížové reakce s jinými steroidy.
• Široký dynamický rozsah umožňuje stanovení velmi nízkých i vyšších hladin aldosteronu v klinických a výzkumných laboratořích.
• Rychlá a reproducibilní příprava vzorků vhodná pro rutinní provoz QA/QC a výzkum.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření metodiky na multiplexní analýzu dalších steroidních hormonů v jednom měření, integrace s automatizovanými extrakčními systémy a kombinace s HRMS pro identifikaci nových metabolitů. Dále lze metodu adaptovat pro jiná biofluidní média.

Závěr

LCMS-8060NX nabízí citlivou, přesnou a spolehlivou analýzu aldosteronu v lidském séru v rozsahu 0,5–10000 pg/mL. Metoda je plně vhodná pro klinické a výzkumné aplikace vyžadující vysokou selektivitu a reprodukovatelnost.