Around the LC System in 45 Slides

Význam tématu

Provoz spolehlivého kapalinového chromatografu (LC) vyžaduje pravidelnou údržbu a optimalizované vzorkové přípravy, aby se minimalizovaly poruchy, ghost peaks a nestabilní tlak. Kvalitní péče o degaser, pumpu, autosampler i detektor vede k delší životnosti přístroje a zajišťuje konzistentní chromatografické výsledky. Současně vhodné techniky přípravy vzorků (filtrace, SPE, QuEChERS, EMR-Lipid) významně omezují kontaminaci a opotřebení kapilár, frit a kolon.

Cíle a přehled článku

Text popisuje klíčové procedury údržby LC systému “od lahve se solventem až po detektor” a představuje moderní přístupy k čištění vzorků a optimalizaci chromatografického procesu. Autoři ilustrují, jak předcházet tlakových špičkám, zlepšit tvary piků a zabránit zanášení přístrojových komponent prostřednictvím jednoduchých ale efektivních opatření.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika spočívá ve třech vzájemně propojených krocích:

• Prevence a diagnostika problémů v solventní cestě (vysoké kvality rozpouštědla, pravidelná výměna lahví, předehřev frakcí degaseru).
• Ošetření klíčových mechanických částí pumpy a autosampleru (výměna těsnění, frit, ventilů, rotor seal a metering seal) podle frekvenčního plánu.
• Sample preparation: základní filtrace, precipitace bílkovin (Captiva ND), lipid removal (EMR-Lipid), klasické SPE a dispersní SPE (QuEChERS) pro odstraňování nečistot a mastných složek.

Použitá instrumentace:

• Agilent HPLC systémy s degaserem a dual-pumpou
• Injektor a autosampler s Quick Connect/Quick Turn armaturami
• Vizuální detektor UV/VWD a DAD
• Kapilární kolony Poroshell 120, StableBond, Eclipse Plus C18/C8, High pH C-fáze
• In-line filtry LC-MS a UHPLC (0,2–0,3 μm)
• Cartridges a 96-well SPE (Bond Elut), Captiva ND a Captiva ND Lipids, QuEChERS dSPE kity, EMR-Lipid sorbenty

Hlavní výsledky a diskuse

• Pravidelná výměna filtrů, ventilových těsnění a frit výrazně snižuje riziko tlakového skoku a zlepšuje stabilitu retence i baseline.
• Správné seřízení Quick Connect konektorů eliminuje mrtvé prostory a netěsnosti, zajišťuje reprodukovatelnost chromatogramů.
• EMR-Lipid v kombinaci s QuEChERS významně odbourává lipidy a fosfolipidy, snižuje iontové potlačení a prodlužuje životnost kolony.
• Použití Poroshell fritů odolných vůči zanášení umožňuje stovky injekcí bez nárůstu tlaku a zhoršení efektivity separace.
• Cílená údržba detektorů UV/DAD (čištění flow cell, výměna lampy) napomáhá udržet citlivost a snižuje artefakty z vysrážených solí.

Přínosy a praktické využití metody

Implementace komplexního plánu údržby a moderních příprav vzorků přináší:

• Snížení prostojů a nákladů na servis
• Zlepšení přesnosti, přesvědčivosti výsledků a menší variabilitu retencí
• Omezení carry-over a ghost peaks
• Vyšší průtok vzorků díky dlouhodobě stabilnímu tlaku
• Prodlužení životnosti chromatografických kolon a pumpních komponent

Budoucí trendy a možnosti využití

• Automatizace vzorkové přípravy s robotickými platformami a on-line SPE moduly
• Vývoj nových sorbentů s vyšší selektivitou a odolností vůči extrémním pH
• Integrace senzorů pro prediktivní údržbu a diagnostiku stavu přístroje
• Zelené chromatografické metody s nízkým objemem organických rozpouštědel
• Vyšší využití umělé inteligence při optimalizaci gradientů, teplotních profilů a plánů údržby

Závěr

Pro zajištění spolehlivého a reprodukovatelného LC provozu je zásadní kombinace cílené údržby přístrojových dílů a efektivní přípravy vzorků. Dodržováním uvedených postupů lze minimalizovat poruchy, prodloužit životnost komponent i kolon a dosáhnout vyšší analytické výkonnosti.

Reference

• Steed R., Ucci A. Around the LC System in 45 Slides, Agilent Technologies, 2016