Accurate and reliable quantitation of p-toluenesulfonates genotoxic impurities in an active pharmaceutical ingredient by HPLC-UV

Význam tématu

Genotoxické p-toluensulfonáty jsou potenciálně karcinogenní nečistoty vznikající při použití kyseliny p-toluensulfonové jako protiměny v procesu syntézy léčivých látek. Přesné stanovení těchto látek v konečném API je klíčové pro splnění regulačních limitů stanovených FDA a EMA (TTC 1,5 µg/den).

Cíle a přehled studie / článku

Cílem práce bylo vyvinout a validovat HPLC-UV metodu pro kvantifikaci čtyř p-toluensulfonátů (metyl-, ethyl-, propyl- a isopropyl-TSF) v API aprepitantu. Studie hodnotí linearitu, detekční a kvantifikační limity a zpětné zisky metodou spike recoveries.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky:

• Standardní roztoky analyz: 1 mg/mL v acetonitrilu, kalibrační řada 0,01–2,5 µg/mL, LOD stanovený na 0,005 µg/mL.
• Vzorek aprepitantu 1 mg/mL ve vodě/acetonitrilu 50/50 (v/v).

Instrumentace:

• UHPLC systém Thermo Scientific Vanquish Flex Quaternary.
• Kolona Acclaim Polar Advantage II 150×2,1 mm, 2,2 µm, teplota 35 °C.
• Mobilní fáze A: 15 mM acetát amonný, B: methanol, gradient 60–73 % B, průtok 0,3 mL/min.
• Detekce UV při 225 nm, sběr 10 Hz, objem injekce 10 µL.

Hlavní výsledky a diskuse

Linearity všech čtyř látek vykázala korelační koeficienty R2 > 0,9998. LOD se pohybovaly mezi 3,3 a 4,1 ng/mL, LOQ mezi 9,4 a 10,8 ng/mL. Recoveries při spike úrovních 0,01; 1; 2,5 µg/mL byly v rozmezí 90–99 % (isopropyl-TSF 73 % při LOQ úrovni). Dynamický rozsah detekce umožňuje kvantifikaci impurit až do 0,02 % relativní špičkové plochy API.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí vysokou citlivost a široký dynamický rozsah vhodný pro rutinní kontrolu genotoxických impurit v API. Splňuje regulační požadavky na detekční limity a je snadno implementovatelná v QA/QC laboratořích farmaceutického průmyslu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Možnosti rozšíření zahrnují:

• kombinaci s hmotnostní spektrometrií pro potvrzení identity;
• miniaturizaci a automatizaci vzorkovacího procesu;
• aplikaci principů analytického quality by design;
• rozšíření na další škály genotoxických látek v rámci PAT.

Závěr

Vyvinutá HPLC-UV metoda pro p-toluensulfonáty v aprepitantu dosahuje vysoké citlivosti, výborné linearity a spolehlivých zpětných zisků. Metoda je vhodná pro splnění přísných regulačních požadavků na genotoxické impurity.

Reference

• Zacharis CK; Vastardi E Application of analytical quality by design principles for determination of alkyl p-toluensulfonátů impurities in Aprepitant by HPLC Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 2018 150 152–161
• US FDA Guidance for Industry Genotoxic and Carcinogenic Impurities in Drug Substances and Products Recommended Approach December 2008
• European Medicines Agency Guidelines on the limits of genotoxic impurities EMEA CHMP QWP 251344 2006