USP Assay Method Transfer for Cephradine from a Traditional 5 μm Column to Agilent InfinityLab Poroshell 120 Columns

Význam tématu

Monografie USP běžně používají starší HPLC kolony s totálně porézními částicemi, což vede k delším analýzám a vyšší spotřebě rozpouštědel. Modernizace těchto metod použitím sloupců s povrchově porézními částicemi (SPP) zvyšuje účinnost separace, šetří čas i materiál a podporuje udržitelnost v farmaceutické analytice.

Cíle a přehled studie

Hlavním cílem bylo přenést USP metodiku pro stanovení cephradinu z konvenčního sloupce 5 µm (4.6×250 mm) na Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 sloupce s částicemi 2.7 µm v různých délkách, aniž by bylo nutné provádět revalidaci. Studie vyhodnotila tři formáty sloupců a upravila chromatografické podmínky podle doporučení USP <621>.

Použitá metodika a instrumentace

Analýzy probíhaly v isokratickém režimu na systému Agilent 1260 Infinity II s DAD detektorem při 254 nm. Mobilní fáze byla směsí vody, methanolu, sodné octanové pufry a octové kyseliny. Parametry průtoku a objemu injekce byly přepočteny dle rovnic USP <621> pro zachování konstantního poměru poměru délky sloupce k velikosti částic (L/dp). Použitá instrumentace:

• Agilent 1260 Infinity II LC systém
• Quaternární pumpa a Vial Sampler
• Multicolumn Thermostat s InfinityLab Quick Connect
• Diodový poleový detektor G7115A
• Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 sloupce (4.6×100 mm, 4.6×75 mm, 3×100 mm)

Hlavní výsledky a diskuse

Modernizované metody splnily všechny system suitability kritéria USP bez dodatečné validace. Sloupce s povrchově porézními částicemi dosáhly srovnatelného počtu teoretických destilačních pater, symetrie špiček a rozlišení mezi cephradinem a cephalexinem jako původní 5 µm sloupec. Celková doba analýzy se zkrátila až o 80–86 % a spotřeba mobilní fáze klesla o 62–75 %, v závislosti na formátu sloupce a průtoku.

Přínosy a praktické využití metody

Zrychlení analýz a výrazná úspora rozpouštědel snižují provozní náklady i ekologickou stopu. Metoda je ideální pro rutinní QC analýzy farmaceutických surovin, kde je klíčové dodržení USP monografií. Široká nabídka Poroshell sloupců usnadňuje adaptaci dalších farmaceutických metod.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření přístupu na gradientní metody, hlubší integrace s UHPLC technologiemi, aplikace částic menších než 2 µm a automatizace úprav metod. Trendem je také důraz na zelenou chemii a miniaturizaci separací.

Závěr

Studie prokázala, že podle USP <621> lze bez nutné revalidace přenést isokratické metody z TPP na SPP sloupce. Modernizace významně snižuje časové a materiálové nároky při zachování kvality separace a souladu s farmaceutickými standardy.

Reference

1. USP Harmonized Standards Home Page. Supplement USP Stage 4 Harmonization, Official, December 1, 2022
2. USP Monographs: Cephradine, United States Pharmacopeia, 2024