MEETING DEMANDS FOR IMPROVED MS PERFORMANCE TO SUPPORT DEEPER PRODUCT LC-MS CHARACTERIZATION WITH MULTI-REFLECTING TOF MS TECHNOLOGY

Význam tématu

Liquid chromatography coupled with mass spectrometry je klíčová metoda pro podrobnou charakterizaci biotherapeutik a díky novým MRT-TOF detekčním cyklům umožňuje detekci produktových variant s vyšší přesností hmotnosti, citlivostí a dynamickým rozsahem.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo demonstrovat výkon systému Xevo MRT spojeného s multi reflect elektrony pro hloubkovou LC-MS charakterizaci protilátek, peptidů a syntetických oligonukleotidů v rámci výzkumu a vývoje biotherapeutik.

Použitá metodika a instrumentace

Subunitová analýza a peptidové mapování probíhalo na LC systémech ACQUITY Premier s kolonkami Protein BEH C4 300 Å a Peptide BEH C18. Oligonukleotidová analýza využila kolonu Oligonucleotide C18 130 Å a ion pair mobilní fáze s TEA HFIP. Hmotnostní spektrometr Xevo MRT Q-TOF poskytuje vysoké rozlišení přibližně 100 000 FWHM, sub ppm hmotnostní přesnost a dynamický rozsah čtyři až pět řádů.

Hlavní výsledky a diskuse

• Subunitová analýza protilátky odhalila hlavní glykoformy s chybou menší než 2 ppm a stabilními opakovatelnými signály.
• Peptidové mapování dosáhlo 98 % pokrytí sekvence, maximální hmotnostní chyba pod 2 ppm a vysoké reprodukovatelnosti dat.
• Syntetický oligonukleotid GEM 91 byl plně potvrzen v cíleném MS/MS módu, s limitou detekce až 0,02 ng na kolonu.
• Kvantitativní analýza peptidu ALPEPIEK prokázala dynamický rozsah pěti řádů, koeficient určení R vysoký nad 0,999 a relativní odchylku menší než 10 %.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje spolehlivou identifikaci produktových variant a nečistot, potvrzení sekvence, sledování kritických kvality atributů a kvantifikaci při minimální spotřebě vzorku. To podporuje rozhodování v procesu vývoje, validace procesů i rutinní kontroly kvality biotherapeutik.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj automatizovaných compliant ready workflow, zvyšování hmotnostního rozlišení nad jeden milion FWHM a aplikace na komplexní glykoproteiny, oligonukleotidové terapie a nové modality biologických léčiv s rozsáhlou modifikací.

Závěr

Inovativní optika multi reflect v systému Xevo MRT významně rozšiřuje schopnosti LC-MS charakterizace biomolekul díky kombinaci vysokého rozlišení, výjimečné hmotnostní přesnosti, citlivosti a širokého dynamického rozsahu, což přináší vyšší důvěru v analýzu moderních biotherapeutik.

Reference

• Waters Corporation. Xevo MRT technology brochure. Milford MA 2024
• Waters Corporation. Deep LC MS characterization workflows white paper. 2024
• Future of multi reflect TOF in mass spectrometry. International Journal of Mass Spectrometry 2025