Jak na screening s novým LC/MS QTOF Revident

Význam tématu

HRMS screening s LC-QTOF poskytuje vysokou selektivitu a citlivost pro detekci tisíců analytů bez potřeby standardů. Platforma Revident kombinuje automatizované ladění, aktivní monitoring a pokročilou datovou analýzu, což usnadňuje rychlé a spolehlivé vyhodnocení komplexních vzorků.

Cíle a přehled studie / článku

Článek představuje Agilent Revident LC/QTOF a modulární řešení MassHunter 12 pro simultánní cílenou kvantifikaci a nestrukturované screeningové analýzy. Důraz je kladen na použití režimu All Ions MS/MS, integraci PCDL knihoven a inteligentní reflexní strategie pro potvrzení nálezů.

Použitá metodika a instrumentace

• Instrumentace:
  Agilent 1290 Infinity LC; Agilent Revident QTOF; kolona Zorbax EC-C18 100×2.1 mm, 1.8 µm; ESI+; injekce 1 µl.
• Automatizace:
  SWARM autotune optimalizuje ladicí parametry; Early Maintenance Feedback monitoruje stav systému; plánovaná kalibrace m/z.
• Režim All Ions MS/MS (DIA):
  kontinuální sběr fragmentů při kolizních energiích 10, 20, 40 V; vysoký duty cycle; extrakce produktových iontů dle MS/MS knihovny a koeluční skóre.
• Predikce retenčního času:
  matematické modelování založené na chemicko-fyzikálních vlastnostech a tréninku na stovkách standardů.
• Software:
  MassHunter Quant 12 pro kvantifikaci a Screener modul s inteligentním reflexem k potvrzení pozitivních nálezů.

Hlavní výsledky a diskuse

All Ions MS/MS umožňuje detekci a konfirmaci analýz bez selekce prekurzoru, avšak je náchylný k interferencím. Implementace koelučního skóre, využití více fragmentů a filtrace na základě predikovaných retenčních časů významně snižuje počet falešně pozitivních i negativních nálezů. Validace predikčního modelu RT ukázala nízkou odchylku od experimentálních hodnot, což výrazně zlepšuje selektivitu screeningových analýz.

Přínosy a praktické využití metody

• Integrace cílené kvantifikace a screeningových analýz v jednom softwarovém balíku.
• Rozsáhlé PCDL knihovny (přes 14 500 analytů, více než 6 000 MS/MS spekter) dostupné v ChemVista.
• Inteligentní Reflex pro automatické přepnutí na cílenou MS/MS konfirmaci a snížení falešně pozitivních výsledků.
• Predikce retenčního času umožňuje identifikovat analyty bez referenčních standardů a zrychluje vyhodnocení komplexních vzorků.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozšiřování komunitních i komerčních HRMS databází, zdokonalování predikčních modelů retenčních časů a jejich plná integrace do analytických workflow. Aplikace ve forenzní toxikologii, environmentálních a potravinových analýzách. Kratší chromatografické metody a pokročilé algoritmy pro analýzu DIA dat nabídnou vyšší průchodnost a přesnost identifikace.

Závěr

Platforma Revident s All Ions MS/MS a inteligentním reflexem představuje robustní a efektivní řešení pro komplexní screening a kvantifikaci analytů. Díky automatizaci, rozsáhlým knihovnám a predikci retenčních časů lze výrazně urychlit identifikaci a zvýšit kvalitu analytických výsledků ve výzkumných i provozních podmínkách.

Reference

• Nižáková A. et al. Validation of retention time prediction models for LC-HRMS screening. Analytica Chimica Acta 2021; DOI: 10.1016/j.aca.2021.339035