Agilent Captiva EMR–Lipid Manual Plate Preconditioning

Význam tématu

Manuální předkondicionování 96-jamkové desky s Agilent Captiva EMR–Lipid zásadně zlepšuje kvalitu separace biomolekul v LC/MS omics workflow. Předkondicionování předchází vazbě nechtěných kontaminantů, zajišťuje konzistentní tok rozpouštědla a optimalizuje retenci cílových analyzátů.

Cíle a přehled studie / článku

Tato metodika popisuje manuální postup předkondicionování desky pomocí pozitivního tlakového manifoldu. Cílem je připravit sorbent na následné frakcionace metabolitů, lipidů a proteinů z plazmy nebo kultivačních vzorků, aby byla dosažena vysoká reprodukovatelnost a efektivita extrakce.

Použitá metodika

Pro předkondicionování se připraví 180 ml směsi voda:methanol:ethanol (2:1:1), použité rozpouštědla musí být LC/MS třídy nebo vyšší. Každá z 96 jamek desky obdrží 800 µl této směsi, která je následně protlačena skrz sorbent pomocí tlakového manifoldu. Proces se opakuje dvakrát, přičemž nejprve se používá nastavení nízkého průtoku k zajištění rovnoměrné distribuce a poté vysoký tlak (10–20 psi) pro kompletní odstranění zbytkového rozpouštědla a nečistot.

Použitá instrumentace

• Agilent Captiva EMR–Lipid desky, 96-well, kód 5190-1001
• Agilent pozitivní tlakový manifold PPM-96 (low flow/high flow), kód 5191-4116
• Agilent 2-column reservoir, kód 203852-100
• Agilent single cavity reservoir, kód 201244-100
• Milli-Q Integral System s LC-Pak Polisher a 0,22 µm filtr (MilliporeSigma)

Hlavní výsledky a diskuse

Výsledkem předkondicionování je čistý sorbent s eliminovanými potenciálními kontaminanty, což vede k lepší obnovitelnosti a přesnosti analýzy. Aplikace nízkého a následně vysokého tlaku garantuje kompletní odstranění zbytků rozpouštědel a rušivých látek ve filtrech. Tento postup zvyšuje citlivost LC/MS měření a snižuje šum v signálu.

Přínosy a praktické využití metody

• Zvýšení reprodukovatelnosti extrakce metabolitů, lipidů i proteinů
• Minimalizace křížové kontaminace mezi vzorky
• Optimalizace pracovní doby díky modularitě postupu
• Kompatibilita s manuálními i automatizovanými platformami Agilent

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace předkondicionování do plně automatizovaných omics workflow
• Rozšíření metody na další typy matrice, např. tkáňové extrakty
• Vývoj upravených sorbentů pro selektivní retenci specifických tříd lipidů
• Vyšší míra miniaturizace a high-throughput aplikace

Závěr

Manuální předkondicionování s Agilent Captiva EMR–Lipid je klíčovým krokem k dosažení vysoce kvalitních a reprodukovatelných dat v LC/MS omics analýzách. Dodržení navrženého protokolu s vhodně zvolenými tlakovými režimy zajišťuje optimální výkon sorbentu a minimalizuje rušivé vlivy během analýzy.

Reference

1. Sartain M. et al. Enabling Automated, Low-Volume Plasma Metabolite Extraction with the Agilent Bravo Platform. Agilent Technologies application note, publication number 5994-2156EN, 2020.
2. Van de Bittner G.C. et al. An Automated Dual Metabolite and Lipid Sample Preparation Workflow for Mammalian Cell Samples. Agilent Technologies technical overview, publication number 5994-5065EN, 2022.
3. Van de Bittner G.C. et al. Automated Fractionation of Low-Volume Plasma Samples for LC/MS Multi-Omics. Agilent Technologies technical overview, publication number 5994-7357EN, 2024.
4. Agilent Captiva EMR–Lipid Manual Fractionation of Low-Volume Plasma Samples for LC/MS Multi-Omics. Agilent Technologies method guide, publication number 5994-7482EN, 2024.