Ultra-sensitive quantitation of therapeutic oligonucleotide in human plasma by a high resolution accurate mass Orbitrap mass spectrometer
Postery | 2024 | Thermo Fisher Scientific | ASMSInstrumentace
Terapeutické oligonukleotidy představují novou generaci léčiv pro vzácná onemocnění, jejichž kvantifikace v biologických matricích je klíčová pro pochopení farmakokinetiky a optimalizaci dávek.
Cílem bylo vyvinout a validovat vysoce citlivou LC-HRAM-MS metodu na platformě Vanquish Horizon UHPLC a Orbitrap Exploris 480 pro kvantifikaci FDA schválených antisense oligonukleotidů Fomivirsenu a Nusinersenu v lidské plazmě s minimální kvantifikační hladinou (LLOQ) 0,05 ng/mL.
Sample prep: extrakce ASO z K2EDTA plazmy fenol/chloroform/isoamyl alkoholem, následné vysušení a rekonstituce v roztocích s interním standardem.
Chromatografie: ion-pair reverzní fáze na C18 kolóně (2,1×50 mm, 2,6 µm) 8min gradientem (solvent A: 15 mM DIPEA/25 mM HFIP ve vodě, solvent B: acetonitril/voda 80:20) při průtoku 0,25 mL/min.
MS: Orbitrap Exploris 480 v negativním módu, tMS2 rezoluce 60000, HCD 23 %, izolace 2 m/z, detekce prekurzor→produkt: Fomivirsen 834,19→319,0173; Nusinersen 889,78→393,0550; IS 820,85→374,0340. Validační a reportovací software: Chromeleon CDS 7.3.2 (cGLP-ready).
LLOQ 0,05 ng/mL pro oba ASO s přesností >80 % a RSD <15 %. Lineární rozsah 0,05–50 ng/mL (R2 >0,998). Chromatografické oddělení ASO a IS se šířkami píků <10 s. V plazmě nebyl detekován crosstalk vybraných tranzicí. Výsledky byly reprodukovatelné mezi pěti replikacemi.
Možné rozšíření na další oligonukleotidy a siRNA léky, integrace automatizované přípravy vzorků, využití umělé inteligence pro analýzu a kvalitu dat, multiplexní analýzy více analytů současně.
Vyvinutá LC-HRAM-MS metoda na UHPLC Orbitrap Exploris 480 nabízí spolehlivou detekci a kvantifikaci Fomivirsenu a Nusinersenu v lidské plazmě s vysokou citlivostí, specifitou, přesností a širokým dynamickým rozsahem.
Yang H., Du M. Ultra-sensitive quantitation of therapeutic oligonucleotide in human plasma by a high resolution accurate mass Orbitrap mass spectrometer, Thermo Fisher Scientific Inc., 2024
LC/MS, LC/MS/MS, LC/Orbitrap, LC/HRMS
ZaměřeníKlinická analýza
VýrobceThermo Fisher Scientific
Souhrn
Význam tématu
Terapeutické oligonukleotidy představují novou generaci léčiv pro vzácná onemocnění, jejichž kvantifikace v biologických matricích je klíčová pro pochopení farmakokinetiky a optimalizaci dávek.
Cíle a přehled studie / článku
Cílem bylo vyvinout a validovat vysoce citlivou LC-HRAM-MS metodu na platformě Vanquish Horizon UHPLC a Orbitrap Exploris 480 pro kvantifikaci FDA schválených antisense oligonukleotidů Fomivirsenu a Nusinersenu v lidské plazmě s minimální kvantifikační hladinou (LLOQ) 0,05 ng/mL.
Použitá metodika a instrumentace
Sample prep: extrakce ASO z K2EDTA plazmy fenol/chloroform/isoamyl alkoholem, následné vysušení a rekonstituce v roztocích s interním standardem.
Chromatografie: ion-pair reverzní fáze na C18 kolóně (2,1×50 mm, 2,6 µm) 8min gradientem (solvent A: 15 mM DIPEA/25 mM HFIP ve vodě, solvent B: acetonitril/voda 80:20) při průtoku 0,25 mL/min.
MS: Orbitrap Exploris 480 v negativním módu, tMS2 rezoluce 60000, HCD 23 %, izolace 2 m/z, detekce prekurzor→produkt: Fomivirsen 834,19→319,0173; Nusinersen 889,78→393,0550; IS 820,85→374,0340. Validační a reportovací software: Chromeleon CDS 7.3.2 (cGLP-ready).
Hlavní výsledky a diskuse
LLOQ 0,05 ng/mL pro oba ASO s přesností >80 % a RSD <15 %. Lineární rozsah 0,05–50 ng/mL (R2 >0,998). Chromatografické oddělení ASO a IS se šířkami píků <10 s. V plazmě nebyl detekován crosstalk vybraných tranzicí. Výsledky byly reprodukovatelné mezi pěti replikacemi.
Přínosy a praktické využití metody
- Ultra citlivá a specifická kvantifikace terapeutických oligonukleotidů
- Rychlý 8min chromatografický běh
- Automatizovaný workflow s compliance-ready reportingem
- Vhodné pro farmakokinetické a toxikokinetické studie klinických vzorků
Budoucí trendy a možnosti využití
Možné rozšíření na další oligonukleotidy a siRNA léky, integrace automatizované přípravy vzorků, využití umělé inteligence pro analýzu a kvalitu dat, multiplexní analýzy více analytů současně.
Závěr
Vyvinutá LC-HRAM-MS metoda na UHPLC Orbitrap Exploris 480 nabízí spolehlivou detekci a kvantifikaci Fomivirsenu a Nusinersenu v lidské plazmě s vysokou citlivostí, specifitou, přesností a širokým dynamickým rozsahem.
Reference
Yang H., Du M. Ultra-sensitive quantitation of therapeutic oligonucleotide in human plasma by a high resolution accurate mass Orbitrap mass spectrometer, Thermo Fisher Scientific Inc., 2024
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Sensitive quantitation of antisense oligonucleotides in plasma using high-resolution, accurate-mass (HRAM) mass spectrometry
2023|Thermo Fisher Scientific|Aplikace
Application note | 002679 Biopharma Sensitive quantitation of antisense oligonucleotides in plasma using high-resolution, accurate-mass (HRAM) mass spectrometry Authors Application benefits Hao Yang , Xuguang Yan , Moo-Young Kim , Sensitive and reproducible quantitation of antisense oligonucleotides with human Jon…
Klíčová slova
fomivirsen, fomivirsennusinersen, nusinersenplasma, plasmahuman, humanquantitation, quantitationiprp, iprpaso, asohram, hramsensitive, sensitivearb, arbcounts, countsquan, quanasos, asosqual, qualminutes
Sensitive LC-MS/MS quantitation of antisense oligonucleotides in plasma using the TSQ Altis Plus mass spectrometer
2023|Thermo Fisher Scientific|Aplikace
Application note | 002568 Biopharma Sensitive LC-MS/MS quantitation of antisense oligonucleotides in plasma using the TSQ Altis Plus mass spectrometer Application benefits Authors Hao Yang , Xuguang Yan , Moo-Young Kim , Sensitive and reproducible quantitation of ASOs with human…
Klíčová slova
nusinersen, nusinersenfomivirsen, fomivirsenaltis, altisquantitation, quantitationasos, asostsq, tsqplasma, plasmaquan, quanplus, plusaso, asosensitive, sensitivematrix, matrixcounts, countslle, llehuman
Reliable quantitation of 11 nitrosamine impurities in metformin drug products using Orbitrap Exploris 120 mass spectrometry
2021|Thermo Fisher Scientific|Aplikace
APPLICATION NOTE 000362 Reliable quantitation of 11 nitrosamine impurities in metformin drug products using Orbitrap Exploris 120 mass spectrometry Authors: Hao Yang,1 Jon Bardsley,2 Min Du,3 Thermo Fisher Scientific, San Jose, CA, US Thermo Fisher Scientific, Hemel Hempstead, UK 3…
Klíčová slova
metformin, metforminpositive, positivenmpa, nmpandma, ndmanitrosamine, nitrosaminendba, ndbanmba, nmbanmea, nmeanpyr, npyrnpip, npipneipa, neipandipa, ndipandpa, ndpandea, ndeadrug
Quantification of 15 tricyclic antidepressants in human plasma or serum by LC-HRAM-MS for clinical research
2021|Thermo Fisher Scientific|Aplikace
TECHNICAL NOTE 66058 Quantification of 15 tricyclic antidepressants in human plasma or serum by LC-HRAM-MS for clinical research Authors: Gaëtan Renoulin1, Mariana Barcenas1, Claudio De Nardi2 Thermo Fisher Scientific, Les Ulis, France 1 Thermo Fisher Scientific, Reinach, Switzerland 2 Keywords:…
Klíčová slova
level, levelnormaprotiline, normaprotilinenortrimipramine, nortrimipraminenorclomipramine, norclomipraminenorclozapine, norclozapinenordoxepin, nordoxepinmaprotiline, maprotilineprotriptyline, protriptylineclomipramine, clomipraminetrimipramine, trimipraminedoxepin, doxepindesipramine, desipramineclozapine, clozapinenortriptyline, nortriptylineimipramine
