Quantitation of free amino acids in human plasma by Single Quadrupole LC-MS

Význam tématu

Aminokyseliny představují klíčové metabolity v lidském organismu a jejich kvantifikace v plazmě je nezbytná pro diagnostiku dědičných poruch metabolismu, výzkum nutričního stavu a monitorování léčby. Rychlé, citlivé a přesné stanovení volných aminokyselin umožňuje zlepšit klinické rozhodování a zpřesnit hodnocení metabolických tras.

Cíle a přehled studie / článku

Tento příspěvek popisuje vývoj a validaci vysoce výkonné metody pro kvantifikaci 37 volných aminokyselin v lidské plazmě pomocí jednopólového LC-MS (Shimadzu LCMS-2050) v režimu SIM. Metoda klade důraz na minimální přípravu vzorku, derivatizaci, chromatografické rozdělení a přesné kvantifikace za pomoci vnitřních standardů.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky byly zpracovány podle protokolu Trivitron Bome Trimaris Quantitative Amino Acids Kit: odčinění plazmy, přidání reagencí pro derivatizaci a centrifugace. Separace proběhla na kolonu Trimaris Quantitative Amino Acids Column při gradientu mobilní fáze A/B (35→95→35 % B) a teplotě 40 °C. Detekce byla prováděna na LCMS-2050 s DUIS ionizací v pozitivním režimu a SIM skenováním. Kvantifikace využívala deuterované vnitřní standardy a kalibrační křivky lineárního typu s R² > 0,995.

Hlavní výsledky a diskuse

• Metoda umožňuje analýzu 37 aminokyselin za méně než 20 minut v plazmě.
• Lineární rozsah koncentrací dosahuje až 550 nmol/ml pro většinu derivatizovaných analytů.
• Všechna stanovení vykazovala vysokou opakovatelnost (intra- i inter-denní RSD < 5 %).
• Kalibrační křivky měly regresní koeficienty R² v intervalu 0,995–1,000.

Metoda byla vyhodnocena pomocí softwaru LabSolutions Insight, který obsahuje QA/QC flagging pro vylučování abnormálních výsledků na základě retence, poměrů iontů a limitů koncentrací.

Přínosy a praktické využití metody

Rychlá příprava vzorku a krátká doba analýzy zvyšují laboratorní propustnost. Použití jednopólového přístroje snižuje pořizovací náklady a komplexitu provozu ve srovnání s LC-MS/MS. Metodu lze snadno implementovat v klinických laboratořích s omezenou odbornou praxí v MS.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření metod založených na jednopolových systémech pro screening vzorků, integraci s automatizovanou přípravou vzorku a další rozvoj softwarových nástrojů pro pokročilé vyhodnocení dat. S rozvojem nových derivatizačních činidel a kolon se dále zkvalitní selektivita a citlivost.

Závěr

Validovaná metoda LC-MS s jedním kvadrupólem nabízí rychlou a spolehlivou platformu pro kvantifikaci volných aminokyselin v lidské plazmě. Dosahuje vysoké lineárnosti, přesnosti i reprodukovatelnosti a umožňuje praktické využití v klinické diagnostice a výzkumu.