Bridge Ion Separation Technology

Význam tématu

Bridge Ion Separation Technology™ představuje průlomovou metodu kapalinové chromatografie, která umožňuje selektivní změnu povrchového náboje stacionární fáze v závislosti na přítomnosti vícenásobně nabitých iontů. Tento princip rozšiřuje možnosti separace organických i anorganických nabitých molekul, jež bývají obtížně oddělitelné konvenčními HPLC kolónami.

Cíle a přehled studie / článku

• Popis nového separačního režimu BIST™ a jeho výhody oproti tradičním iontovým výměnným režimům.
• Předvedení aplikací na modelových sloučeninách: 3,3’-diaminobenzidin, chondroitin 6-sulfát a hyaluronová kyselina.
• Prezentace podmínek mobilní fáze a detekčních metod vhodných pro zachycení změny náboje stacionární fáze.

Použitá metodika a instrumentace

• Kolony:
  • BIST™ B+ 4,6×100 mm, 5 µm (TBP-46.100.0510)
  • BIST™ A 4,6×50 mm, 5 µm (TA-46.50.0510)
• Mobilní fáze:
  • Pro DAB: gradient acetonitril 80–30 % se 0,2 % H₂SO₄, 10 min
  • Pro GAGs (chondroitin, HA): krokový gradient acetonitril od 60 % do 45 %, pufr N,N’-dimetylpiperazin formiát 5 mM, pH 4,0
• Průtok: 1,0 mL/min
• Detekce:
  • UV při 280 nm pro 3,3’-diaminobenzidin
  • ELSD při 70 °C pro sulfátové glykosaminoglykany a hyaluronan

Hlavní výsledky a diskuse

• Při přítomnosti divalentních aniontů (sulfát) se kladná fáze B+ změnila na záporně nabitou, což umožnilo retenci a rozdělení kladných analyzátů, jak ukázaly chromatogramy DAB.
• Použitím multikladného pufru DMP se záporně nabitá fáze BIST™ A přepnula na kladnou, umožňující separaci chondroitin sulfátu, který běžně vyžaduje složité derivatizace.
• Hyaluronan byl úspěšně charakterizován rozsahem molekulových hmotností bez použití velikostně vylučovací chromatografie díky řízené interakci s novou stacionární fází.

Přínosy a praktické využití metody

• Rozšíření chromatografických možností pro náročné aniontové a kationtové analyty bez nutnosti speciálního vybavení.
• Zrychlení analýzy díky jednoduchým gradientním režimům a standardním HPLC systémům.
• Snadná aplikace v biochemii a farmaceutickém výzkumu pro analýzu glykosaminoglykanů a dalších biomolekul.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace BIST™ kolón s hmotnostní spektrometrií pro komplexní analýzu netradičních iontových směsí.
• Vývoj škálovatelných formátů (UHPLC, mikro-LC) pro vysokokapacitní analýzy v QA/QC a bioprocesním monitoringu.
• Optimalizace povrchových modifikací pro selektivní cílení nových tříd nabitých biomolekul a průmyslových katalyzátorů.

Závěr

Bridge Ion Separation Technology™ nabízí jedinečný mechanismus proměnné polarity stacionární fáze, který významně rozšiřuje chromatografický arzenál pro separaci obtížně rozlišitelných iontů. Prezentované aplikace potvrzují univerzálnost a vysokou efektivitu této platformy.

Reference