FlexiFocus ™ Slides: Chemically Modified Sample-Focussing MALDI Targets to Enhance Productivity and Throughput

Význam tématu

Chemicky modifikované MALDI targety FlexiFocus představují inovativní řešení pro vysoce produktivní a automatizovanou analýzu. Díky hydrofobnímu povrchu okolí s malými otevřenými hydrofilními oblastmi dochází k soustředění a zadržení kapky v centru pozice. Tato konstrukce zvyšuje reprodukovatelnost, minimalizuje problémy s nesprávným nanesením a posiluje citlivost měření.

Cíle a přehled studie

Studie měla za cíl vyhodnotit výkon FlexiFocus inserů ve formátech 48 a 96 pozic při analýze vzorků na bench-top MALDI-TOF přístrojích Shimadzu. Posouzeny byly klíčové parametry: přesnost soustředění vzorku, kompatibilita s běžnými MALDI matricemi a organickými rozpouštědly, citlivostní limity při detekci peptidů, proteinů, lipidů a oligonukleotidů a integrace do automatizovaných QC postupů.

Použitá metodika a instrumentace

• Instrumentace: Shimadzu MALDI-8020 (bench-top MALDI-TOF) s adaptérem pro FlexiFocus insert.
• Formáty slidů: FlexiFocus-48 a FlexiFocus-96, kovová základna s chemicky modifikovanou hydrofobní vrstvou a vyznačenými hydrofilními kruhovými oblastmi (900 µm).
• Matice: CHCA, sinapinová kyselina, DHB, 3-HPA; rozpouštědla: voda, acetonitril, methanol, ethanol, chloroform, TFA (< 0,1 %).
• Příprava vzorků: triacylglyceroly v olejích, imunoglobulin A, Glu-fib peptidové standardy, oligonukleotidy 20-mer, komerční BSA digest s volitelným přídavkem ADHP pro potlačení clusterů.

Hlavní výsledky a diskuse

• Soustředění kapky: na FlexiFocus slidu migrovaly i off-centre depozice vzorku do středu, zatímco standardní FlexiMass-SR48 zanechávala nesouměrné pozice.
• Lipidová analýza: ve spektru EVOO byly dominující triacylglyceroly OOO, OOP, OOL, POL s dobře rozlišenými izotopickými pásem.
• Analýza proteinů a peptidů: IgA v SA matričním systému detekována jako monomer (~160 kDa), dvojnásobný náboj (~80 kDa) a řetězec HC (~55 kDa). Peptid GluFib detekován spolehlivě až při 25 amol na slidu s S/N > 3:1.
• Oligonukleotidy: 20-mer ACGT... detekován s minimem solných aduktů a následná MALDI-ISD analýza dosáhla 75 % sekvenční pokrytí.
• Citlivostní enhancement: u BSA digest identifikace na FlexiFocus byla možná již při 100 amol oproti 300 amol na standardním slidu. Při akumulaci 50 střel a přidání ADHP dosáhl limit 30 amol s hodnocením Mascot PMF.
• Automatizované QC workflow: v aplikaci QC Reporter na FlexiFocus-96 slide bylo zobrazení výsledků intuitivní a barevně kódované (zelená Pass, oranžová Query, červená Fail).

Přínosy a praktické využití metody

FlexiFocus targety výrazně zlepšují reprodukovatelnost a citlivost v high-throughput MALDI-TOF analýzách. Umožňují přesné lokalizování vzorku bez nutnosti manuální korekce, podporují široké spektrum aplikací (proteomika, lipidomika, oligonukleotidy) a snadno se integrují do automatizovaných QC systémů. Snížení detekčního limitu do nízkých amolových úrovní otevírá nové možnosti v bioanalytice a farmaceutickém výzkumu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření formátů targetů a optimalizace povrchových modifikací pro specifické aplikace, včetně analýzy malých metabolitů a komplexních biologických matric. Integrace s vyššími zrychleními laseru, rozvojem datové analýzy a strojovým učením umožní další zvýšení throughput a automatizace. V blízké budoucnosti mohou být targety FlexiFocus nasazeny v klinické diagnostice a personalizované medicíně pro vysoce citlivé biomarkerové studie.

Závěr

FlexiFocus slides představují efektivní nástroj pro soustředěnou a citlivou MALDI-TOF analýzu v režimu vysoké propustnosti. Díky unikátnímu povrchovému designu dosahují lepší reprodukovatelnosti, nižších detekčních limitů a kompatibility se standardními matricemi a automatikou. Tato technologie nabízí široké využití v akademickém i průmyslovém výzkumu.

Reference

Žádné externí literární odkazy nebyly uvedeny.