ANALYSIS OF CARBOXY-THC USING UPLC-MS/MS

Význam tématu

Analýza karboxy-THC ve vlasech poskytuje dlouhodobý záznam expozice kanabinoidům, umožňuje odlišení aktivního užívání od pasivní inhalace kouře a vyhovuje požadavkům forenzní praxe podle doporučení Society of Hair Testing.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout robustní a citlivou UPLC-MS/MS metodu pro kvantifikaci 11-nor-9-karboxy-Δ9-THC v lidských vlasech, splňující potvrzovací limity stanovené společností SoHT, a ověřit její výkonnost v reálných vzorcích.

Použitá metodika a instrumentace

• Váha vzorku: 25 mg se stříhanými, odmaštěnými a nasekanými vlasy
• Spiking kalibrátorů a internal standard: karboxy-THC (0,2–10 pg/mg) a karboxy-THC-D3
• Extrakce: inkubace s reagencí M3 60 min při 100 °C
• Čištění: SPE Oasis PRiME HLB 30 mg, oplach acetonitril/hexan, eluace acetonitril/methanol (9:1)
• Rekonstrukce: 50 % methanol s amoniakem
• UPLC podmínky:
  • Souprava: ACQUITY UPLC I-Class FTN PLUS
  • Kolona: ACQUITY Premier BEH C18 1,7 µm, 2,1×150 mm s VanGuard FIT
  • Mobilní fáze A: 0,4 mM fluorid amonný s 0,0025 % hydroxidu amonného
  • Mobilní fáze B: methanol
  • Gradientní eluce podle stanoveného programu, teplota kolony 55 °C, tok 0,35 mL/min, objem injekce 15 µL
• MS/MS podmínky:
  • Přístroj: Xevo TQ-Absolute, ESI negativní ionizace
  • MRM přechody: m/z 343,1→191,0 (kvantifikátor), 343,1→245,1 (kvalifikátor), 346,1→248,1 (IS)

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosahuje lineárnosti v rozmezí 0,2–10 pg/mg s R2>0,99 a přesností do 15 % (nejnižší kalibrátor do 20 %). Celková variabilita %RSD je 8,4 % a vnitroskupinová do 1,8 %. Signálový supresní efekt (~36 %) je účinně kompenzován použitím izotopově značeného standardu. Žádné carry-over nebylo detekováno po injekci vzorku na úrovni 5 pg/mg.

Přínosy a praktické využití metody

• Dosažení sub pg/mg citlivosti umožňuje spolehlivé potvrzení karboxy-THC ve vlasech
• Jednoduchý a dohledný odběr vzorku bez nutnosti zdravotnického personálu
• Robustní protokol vhodný pro forenzní a QA/QC laboratoře
• Dlouhodobé okno detekce až několik měsíců zpětně

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další zvyšování citlivosti pomocí high-resolution MS a nano-UPLC
• Automatizace přípravy vzorků a integrace robotických systémů
• Rozšíření analýzy na další metabolity a toxikologické markery ve vlasech
• Implementace strojového učení pro interpretaci složitých dat

Závěr

Navržená UPLC-MS/MS metoda splňuje požadavky SoHT na potvrzovací analýzu karboxy-THC ve vlasech s vysokou přesností, citlivostí a robustností, což ji činí vhodnou pro forenzní a průmyslovou toxikologii.

Reference

• Cooper GA, Kronstrand R, Kintz P. Society of Hair Testing guidelines for drug testing in hair. Forensic Science International 281 (2012) 20–24.
• Statements of the Society of Hair Testing concerning the examination of drugs in human hair [cit. 14 Aug 2023].