Validation of an improved ion chromatography method for the limit of choline test in the USP Succinylcholine Chloride monograph

Význam tématu

Succinylcholinchlorid je rychle působící svalový relaxant používaný při krátkodobých lékařských výkonech. Čistota této léčivé látky je zásadní, přičemž limity nežádoucího cholinu stanovuje USP monografie. Stávající iontově chromatografická metoda vykazovala po několika hodinách analýzy posun báze a změnu retenční doby cholinu, což ohrožovalo spolehlivost výsledků. Vyvinutí stabilnějšího, přesnějšího a validovaného postupu přináší vyšší důvěryhodnost kontroly kvality léčiva.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo ověřit a validovat upravenou iontově chromatografickou (IC) metodu pro test limitu cholinu ve USP monografii Succinylcholine Chloride. Práce sledovala:

• Identifikaci příčin posunu báze a klesající retence v původní metodě.
• Optimalizaci elučního programu zavedením MSA proplachu.
• Validaci nové metody podle ICH Q2 a USP <1225>, <621>.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda využívá gradientní program methansulfonové kyseliny (MSA): stabilní 6 mM MSA k oddělení cholinu od běžných kationtů, po analýze 18minutový proplach 50 mM MSA k elučnímu odstranění succinylcholinu a následné navrácení na výchozí podmínky. Výsledky se zjišťují pomocí potlačené vodivosti.

Použitá instrumentace

• Dionex ICS-5000+ HPIC systém s generátorem eluentu EGC 500 MSA a CERS 500 potlačovačem (recyklační režim, 37 mA).
• Dionex IonPac CS19 analytická kolona (2 × 250 mm) a CG19 ochranná kolona (2 × 50 mm).
• Autosampler AS-AP (5 µL smyčka), Chromeleon 7.2.

Hlavní výsledky a diskuse

Optimalizovaná metoda zajistila stabilní retenční čas cholinu (~10 min) bez posunu báze ani po 6–7 hodinách kontinuálního provozu. Validace prokázala:

• Lineární kalibraci cholinu v rozsahu 0,2–50 µg/mL (r2 = 0,9998).
• Detekční a stanovitelný limit LOD = 0,06 µg/mL, LOQ = 0,2 µg/mL.
• Přesnost (intra- i interdenní RSD < 3,5 %) a dobré recovery spikovaných vzorků (104–118 %).
• Robustnost metodiky při změnách průtoku (±10 %), teploty kolony (27–33 °C) a koncentrace MSA (±10 %) s variacemi RSD < 4 %.

Přínosy a praktické využití metody

Nová IC metoda zajišťuje spolehlivou, reprodukovatelnou a citlivou kontrolu obsahu cholinu v succinylcholinchloridu. Umožňuje plnění požadavků USP monografie a automatizované zpracování rutinních vzorků v QA/QC laboratořích farmaceutického průmyslu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Potenciál dalšího vývoje zahrnuje implementaci rychlejších kolonků s menšími částicemi, využití tandemové detekce hmotnostní spektrometrií pro vyšší selektivitu, on-line přípravu vzorků nebo modulární potlačovače pro snížení spotřeby elučního činidla.

Závěr

Navržená upravená iontově chromatografická metoda s proplachem 50 mM MSA odstraňuje problémy s akumulací succinylcholinu a posunem báze původního postupu, splňuje i převyšuje požadavky USP a ICH na linearitu, citlivost, přesnost i robustnost a je vhodná k oficiální revizi monografie Succinylcholine Chloride.

Reference

1. Hospira, Inc. Quelicin (Succinylcholine Chloride Injection, USP) label, 2010.
2. Sandoz Inc. Anectine (Succinylcholine Chloride Injection, USP) label, 2010.
3. USP 40–NF 35, Succinylcholine Chloride monograph, 2018.
4. Pharmacopeia Forum 44(2), návrh revize Succinylcholine Chloride monograph, 2018.
5. ICH Q2A Validation of Analytical Procedures: Definition and Terminology, 1995.
6. ICH Q2B Validation of Analytical Procedures: Methodology, 1996.
7. USP General Chapter <1225> Validation of Compendial Methods, USP40 NF35, 2017.
8. USP General Chapter <621> Chromatography, USP40 NF35, 2017.