Agilent ZORBAX Rapid Resolution High Definition 300SB-C8 Threaded Column

Význam tématu

Ultra-vysoko výkonná kapalinová chromatografie (UHPLC) se stává standardem pro separaci peptidek, proteinů a malých molekul díky výraznému zkrácení analýz a zlepšení rozlišení. Stabilní C8 povrch ZORBAX RRHD 300SB-C8 nabírá na významu při analýzách vyžadujících dlouhodobou reprodukovatelnost, odolnost vůči agresivním mobilem fázím (nízké pH, iontové přidávky) a kompatibilitu s vysoce citlivými detektory jako je hmotnostní spektrometrie.

Cíle a přehled studie / článku

Popis a charakteristika nové řady UHPLC kolon Agilent ZORBAX Rapid Resolution High Definition 300SB-C8. Dokument shrnuje:

• Strukturu a složení stacionární fáze
• Optimální provozní podmínky
• Výsledky kvality a účinnosti separace (QC chromatogram)
• Doporučené postupy údržby a skladování

Použitá metodika a instrumentace

Základní provozní nastavení při QC testu:

• Kolona: ZORBAX RRHD 300SB-C8, 2,1 × 50 mm, 1,8 µm
• Zařízení: Agilent 1290 Infinity LC (UHPLC)
• Mobilní fáze: 35 % acetonitril / 65 % voda
• Průtok: 0,50 mL/min
• Teplota: pokojová (23 °C)
• Detektor: UV při 254 nm
• Vzorek: směs standardních aromatických látek a uracilu

Hlavní výsledky a diskuse

QC chromatogram ukazuje vysokou účinnost (nízké hodnoty HETP), ostré vrcholy a reprodukovatelné retenční časy. Kolony jsou mechanicky stabilní do 1200 bar, optimální životnost do 1000 bar. Diisopropyl-octadecylsilany zajišťují ochranu proti degradaci při
nízkém pH a redukují nespecifickou adsorpci bazických sloučenin. Při pH nad 6 doporučen provoz při nižší teplotě a nízké koncentraci pufru.

Přínosy a praktické využití metody

Využití ZORBAX RRHD 300SB-C8 nabízí:

• Rychlé separace (< 2 min) s vynikajícím rozlišením
• Kompatibilitu s agresivními mobilemi fázemi (TFA, iont-páry)
• Rozšíření aplikací pro intact proteiny a peptidové mapování
• Nízkou detekční mez při MS díky minimálnímu backgroundu

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekávají se další vylepšení UHPLC kolonek: nová nanostrukturovaná povrchní úprava, monolitické a hybridní materiály, integrace s vysokým rozlišením hmotové spektrometrie a automatizované platformy pro peptidovou a proteinovou analýzu.

Závěr

Agilent ZORBAX RRHD 300SB-C8 představuje vysoce účinnou, odolnou a univerzální kolonu pro UHPLC aplikace v oblasti bioanalytiky a farmacie. Správná údržba, volba pH a mobilní fáze prodlužují životnost a zajišťují reprodukovatelné výsledky.

Reference

• H.A. Claessens, M.A. van Straten, J.J. Kirkland. J. Chromatogr. A, 728 (1996) 259.
• L.R. Snyder, J.J. Kirkland. Introduction to Modern Liquid Chromatography, 2nd ed., John Wiley & Sons, 1979.
• L.R. Snyder, J.J. Kirkland, J.L. Glajch. Practical HPLC Method Development, 2nd ed., John Wiley & Sons, 1997.