VITATOX: Sledování a regulace nitrosaminů (NAMs ) v léčivech reálná hrozba nebo emoce

Význam tématu

Zvyšující se pozornost k nitrosaminům v léčivých přípravcích vychází z jejich prokázané genotoxické a karcinogenní aktivity, riziko kontaminace farmaceutických surovin a finálních produktů a přísné regulace farmaceutických autorit. Optimalizace analytických postupů a prevence vzniku nitrosaminů je klíčová pro zajištění bezpečnosti pacientů a dostupnosti léčiv.

Cíle a přehled studie

Autoři představili komplexní pohled na:

• Historii syntézy a biologického účinku nitrosaminů.
• Hlavní zdroje kontaminace v potravinách a léčivech.
• Současnou legislativu a výpočty akceptovatelných limitů (ICH M7).
• Analytické metody pro stanovení nitrosaminů v léčivech.
• Strategie eliminace a redukce obsahu N-nitrosaminů.

Použitá metodika a instrumentace

Pro kvantifikaci nitrosaminů autoři využili moderní chromatografické techniky spřažené s hmotnostní spektrometrií:

• UHPLC–MS/MS (tříčetný kvadrupól, režim MRM pro selektivní detekci prekurzor-produkt).
• LC-HRMS pro odhalení izobarických interferencí a pravou identifikaci fragmentů.
• GC–MS jako doplňková technika při analýze těkavých sloučenin.
• Přípravné kroky: SPE extrakce, ředění vzorku, použití vnitřních standardů a optimalizace teplotního programování pro oddělení rotamerů.

Hlavní výsledky a diskuse

Ve vlastních analýzách laboratoře Zentiva bylo testováno 1 042 vzorků léčiv 25 různých API. Až 80 % vzorků vykázalo nadlimitní obsah nitrosaminů. Diskuse se zaměřila na:

• Matricové efekty a nutnost kompenzace pomocí standardních dodávek a optimalizovaných chromatografických podmínek.
• Problematiku rotamerů ve struktuře N-nitrosaminů a vliv teploty na jejich separaci.
• Divergenci mezi předpokládaným karcinogenním rizikem a skutečnými epidemiologickými daty (statisticky nevýznamný rozdíl výskytu rakoviny u pacientů exponovaných NDMA vs. neexponovaných).

Přínosy a praktické využití metody

Vyvinuté postupy umožňují detekci nitrosaminů na úrovni jednotek ppb, splňují požadavky regulačních institucí a poskytují nástroj pro rutinní monitoring bezpečnosti léčiv. Tyto metody mohou být adaptovány v QA/QC laboratořích farmaceutických firem i v regulačních laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Ve výhledu se očekává:

• Rozšíření vysokorozlišovacích MS metod (Orbitrap, TOF) pro eliminaci izobarických interferencí.
• Automatizace přípravy vzorku a využití mikroskopických SPE formátů ke zvýšení throughput.
• Vývoj účinných nitritových „scavengerů“ a excipientů s nízkým obsahem dusitanů (≤ 0,02 ppm).
• Integrace in silico modelů predikce nitrosaminoformace v raných fázích vývoje API.

Závěr

Regulace nitrosaminů v léčivech je nezbytná pro zajištění pacientské bezpečnosti, avšak vyžaduje vyvážený přístup mezi minimalizací rizika a udržením dostupnosti klíčových terapeutik. Moderní MS-based metody poskytují citlivé a selektivní nástroje pro rutinní monitoring a podporu rozhodování o výrobních procesech.

Reference

1. International Council for Harmonization. ICH Guideline M7(R1). Assessment and Control of DNA Reactive (Mutagenic) Impurities in Pharmaceuticals to Limit Potential Carcinogenic Risk (2018).
2. Maurici D. et al. Genotoxicity and Mutagenicity. Altern. Lab. Anim. 33(1), 117–130 (2005).
3. Fan C.-C., Lin T.-F. N-Nitrosamines in Drinking Water and Beer: Detection and Risk Assessment. Chemosphere 200, 48–56 (2018).
4. Ashworth I.W. et al. Potential for the Formation of N-Nitrosamines during the Manufacture of APIs. Org. Process Res. Dev. 24(9), 1629–1646 (2020).
5. Schlingemann J. et al. Avoiding N-nitrosodimethylamine formation in metformin by limiting DMA and nitrite. Int. J. Pharm. 620, 121740 (2022).
6. Homšak M. et al. Assessment of a Diverse Array of Nitrite Scavengers. Processes 10(11), 2428 (2022).
7. EMA. Scientific Opinion on Nitrosamines in Human Medicinal Products, Article 5(3) Regulation (EC) No 726/2004 (2020).