Nexera lite inert

Význam tématu

Ve výrobě a kontrole kvality biotechnologických léčiv, zejména monoklonálních protilátek, je klíčové přesné stanovení obsahu a agregace proteinů. Vysoká koncentrace solí v mobilní fázi a adsorpce proteinů na kovové povrchy mohou vést ke korozi HPLC systému, ztrátám analyzovaných vzorků a snížené opakovatelnosti měření. Inertní chromatografické systémy proto umožňují dlouhodobou a stabilní analýzu proteinů bez rizika poškození přístroje a snížení kvality dat.

Cíle a přehled studie

Cílem prezentovaného whitepaperu je představit vlastnosti a výhody LC systému Nexera lite inert pro bioseparace. Dokument shrnuje schopnosti systému odolávat korozi při použití halogenidových solí, minimalizovat adsorpci biomolekul, zajistit vysokou stabilitu retenčního času a integrovat pokročilé funkce, jako je pH monitoring, fluorescence detekce a frakcionace.

Použitá metodika

Pro ověření výkonu inertního systému byly provedeny modelové experimenty analýzy monoklonální IgG protilátky metodou gelové filtrace za použití fosfátového pufru obsahujícího chlorid draselný. Dále byla měřena opakovatelnost retenčních časů při pětinásobné injekci, sledován pH průběh mobilní fáze v reálném čase, analyzovány strukturální změny membránových proteinů s GFP detekcí a demonstrována frakcionace fluorescentně značených protilátek.

Použitá instrumentace

• Inertní HPLC systém Nexera lite inert (solventní čerpadlo LC-40i, degasser DGU-403/DGU-405, autosampler SIL-20AC, kolona CTO-40C)
• Přepínací ventily FCV-12AHi/FCV-14AHi
• UV detektor SPD-M40 a PDA detektor SPD-M40 (190–800 nm)
• Fluorescenční detektor RF-20A/AXS
• pH monitor pHM-40
• Frakční kolektor FRC-10A
• Inertní laboratorní lahvičky TORAST-H Bio
• Kolony Shim-pack řady (Bio Diol, Bio IEX, Bio Scepter atd.)

Hlavní výsledky a diskuse

Experimenty prokázaly, že díky plně inertnímu průtoku bez kovových částí nedochází ke korozi při použití 0,25 M solného pufru, což zajistilo stabilní profil agregátů protilátek a opakovatelnost retenčního času s RSD 0,08 %. Real-time pH monitoring odhalil jemné změny pH, které mohou ovlivnit separaci iontově výměnných a gelových kolon. Fluorescenční detekce potvrdila možnost sledovat conformační změny GFP-tagovaných proteinů po tepelném ošetření. Frakcionace s FRC-10A umožnila čistou separaci a sběr cílových frakcí v různých typech zkumavek nebo 96-jamkových destičkách.

Přínosy a praktické využití metody

• Zvýšená životnost a spolehlivost HPLC systému při analýzách solnými pufry
• Minimalizace adsorpce proteinů a vyšší obnovitelnost vzorků
• Vysoká opakovatelnost a kvalita chromatografických dat
• Možnost simultánní detekce pomocí UV, PDA a fluorescence
• Real-time sledování pH pro lepší kontrolu separačních podmínek
• Automatická frakcionace pro následné preparativní kroky

Budoucí trendy a možnosti využití

Systém Nexera lite inert otevírá cestu pro rozšířené aplikace v proteomice, biofarmaceutickém výzkumu a QA/QC laboratořích. Integrace další detekční technologie, automatizace pracovních postupů a využití umělé inteligence pro analýzu chromatografických dat jsou očekávanými trendy. Důležitým směrem je také online kombinace HPLC s hmotnostní spektrometrií pro hlubší charakterizaci komplexních proteinových směsí.

Závěr

Inertní HPLC platforma Nexera lite inert poskytuje bezproblémovou, dlouhodobě reprodukovatelnou analýzu proteinů v náročných podmínkách solných pufrů a minimalizované adsorpce. Nabízí komplexní řešení od přesné injekce až po frakcionaci, což významně zvyšuje efektivitu a spolehlivost bioseparačních procesů.