LC/MS/MS Method Package for Steroid Hormones

Význam tématu

Steroidní hormony hrají klíčovou roli v řízení metabolických, neurologických a genových procesů v organismu. Analytické stanovení jejich hladin v biologických vzorcích je nezbytné pro klinický výzkum, diagnostiku hormonálních poruch a farmakologické studie. Vysoce citlivé a současně komplexní metody umožňují rychlé profilování širokého spektra steroidů, což usnadňuje porovnání fyziologických stavů a zlepšuje reprodukovatelnost výsledků.

Cíle a přehled studie

Cílem popsaného balíčku metod pro LC/MS/MS je nabídnout uživatelům plně validované postupy pro simultánní stanovení 20 steroidních hormonů včetně mineralokortikoidů, glukokortikoidů, androgenů, estrogenů a progestogenů. Metoda je optimalizována pro vysokou citlivost a rychlé rozlišení jednotlivých složek během analýzy trvající pouhých 15 minut.

Použitá metodika

Pro extrakci a koncentrování cílových látek z krevního séra je využito pevné fáze (SPE) a následná derivatizace, která zvyšuje ionizační účinnost steroidů v MS detektoru. Celý proces vyžaduje pouze 200 µl vzorku séra. Chromatografická separace je realizována gradientním elučním programem na reversní fázi, čímž se dosahuje rozlišení všech analyzovaných hormonů během krátké doby.

Použitá instrumentace

• LC/MS/MS systém Shimadzu LCMS-8060NX
• Software LabSolutions LCMS verze 5.118 nebo novější
• SPE kazety pro extrakci séra
• Reagencie pro derivatizaci steroidních hormonů

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožňuje citlivou detekci všech 20 cílových steroidů s vynikajícím rozlišením mezi skupinami mineralokortikoidů, glukokortikoidů, androgenů, estrogenů a progestogenů. Hmotnostní chromatogramy standardních směsí ukazují ostré píky a konzistentní retence v intervalu 2–12 minut. Nízké meze detekce a kvantifikace potvrzují vhodnost metody pro analýzu vzorků s malými objemy a nízkými koncentracemi hormonů.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá a komplexní analýza 20 steroidních hormonů v jednom běhu
• Minimální množství vzorku (200 µl séra) šetří biologický materiál
• Standardizované protokoly předúpravy a analýzy zkracují dobu potřebnou pro vývoj metody
• Vysoká citlivost a reprodukovatelnost vhodná pro výzkum, farmakokinetiku i klinickou chemii

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může směřovat k automatizaci předúpravy vzorků a integraci s vysoce propustnými platformami (UPLC–MS/MS). Rozšíření metody o další steroidní deriváty a metabolity umožní detailnější metabolomické studie. Využití umělé inteligence pro zpracování dat podpoří rychlejší interpretaci výsledků a identifikaci nových biomarkerů.

Závěr

Popsaný balíček metod pro LC/MS/MS nabízí robustní nástroj pro simultánní stanovení 20 steroidních hormonů s vysokou citlivostí, krátkou dobou analýzy a nízkými nároky na objem vzorku. Díky standardizovaným protokolům je možné rychle zavést metodu do výzkumných i klinických laboratoří.

Reference

V původním dokumentu nejsou uvedeny konkrétní citační zdroje.