Analysis of Paromomycin by HPAE-IPAD

Význam tématu

Paromomycin je aminoglykosidové antibiotikum s širokým spektrem, používané v humánní i veterinární medicíně. Přesné stanovení jeho obsahu je klíčové pro bezpečnost a účinnost léčiv, kde tradiční mikrobiální testy postrádají specifičnost, přesnost a rychlost.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout a validovat chromatografickou metodu na bázi vysokovýkonné aniontové výměnné chromatografie s integrovanou pulzní amperometrií (HPAE-IPAD) a automatickou generací hydroxidového eluantu pro kvantitativní stanovení paromomycinum v farmaceutických přípravcích.

Použitá metodika

K separaci byl použit nízkokoncentrovaný eluát KOH (1,8 mM) generovaný elektrolyticky bez přítomnosti karbonátů. Detekce probíhala pomocí AAA-Direct pulzního amperometrického vlnového průběhu bez nutnosti chemické derivatizace. Metoda umožňuje rozlišení dvou hlavních izomerů paromomycinum.

Použitá instrumentace

• IC systém Dionex ICS-3000
• Modul eluentní generace EGC II KOH s CR-ATC
• Kolony CarboPac PA1 (guard 4×50 mm, anal. 4×250 mm)
• Integrovaný pulzní amperometrický detektor s AAA Au jednorázovou elektrodou
• Softwarové řízení Chromeleon

Hlavní výsledky a diskuse

• Izomery paromomycinum elici při přibližně 5,1 a 8,3 min při průtoku 0,5 ml/min.
• Lineární rozsah stanovení 1,25–10 μM (r² ≥ 0,999).
• LOQ 0,10 μM (S/N = 10), LOD 0,03 μM (S/N = 3).
• Intradení a mezidení přesnost RSD < 2 % (n = 9).
• Přesnost (recovery) 96–107 % při doplnění vzorků.
• Ruggednost potvrzena napříč kolonami, eluentními kazetami a různými analytiky.
• Analýza kapslí Humatin® ukázala 279 ± 10 mg paromomycinum oproti deklarovaným 250 mg, což spadá do USP limitů 90–125 %.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí vysokou specifičnost, citlivost a rychlost bez derivatizace, zlepšenou konzistenci díky automatické výrobě eluantu a snadnou údržbu s jednorázovými elektrodami. Vhodná pro rutinní QA/QC analýzy farmaceutických produktů.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření na další aminoglykosidy a antibiotika.
• Integrace do vysoce výkonných a automatizovaných sekvenčních systémů.
• Online monitorování výrobních procesů pro zajištění kvality (QA/QC).

Závěr

Vyvinutá HPAE-IPAD metoda s automatickou generací eluantu splňuje požadavky USP, poskytuje spolehlivé, citlivé a reprodukovatelné stanovení paromomycinum a je vhodná pro rutinní použití v analytických laboratořích.

Reference

1. The Merck Index. 12th Edition, Merck Research Laboratories, Whitehouse Station NJ, 1997.
2. Stead DA. Current Methodologies for the Analysis of Aminoglycosides. J Chromatogr B. 2000;747:69–93.
3. Murray HW, Berman JD, Davies CR, Saravia NG. Advances in Leishmaniasis. Lancet. 2005;366:1561–1577.
4. Olson LL, Pick J, Ellis WY, Lim P. A Chemical Assessment and HPLC Assay Validation of Bulk Paromomycin Sulfate. J Pharm Biomed Anal. 1997;16:131–137.
5. United States Pharmacopeia. Paromomycin Sulfate. USP 27, NF 22, 2004.
6. Cai Y, Cheng J, Mou S, Li Y. Comparative Study on the Analytical Performance of Waveforms for Aminoglycoside Determination by HPLC with Amperometric Detection. J Chromatogr A. 2005;1085:124–130.
7. United States Pharmacopeia 27 NF 22 General Chapter <1225> Validation of Compendial Methods. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc., 2004.