SOLAμ SPE – achieve highly reproducible bioanalytical results with reduced sample volumes

Význam tématu

Analytické metody vyžadující minimální objem vzorku jsou klíčové v bioanalytice, kde je dostupnost biologických matriálů často omezená. Zkrácení doby přípravy vzorku odstraněním kroků sušení a rekonstituce zvyšuje citlivost, zachovává integritu termolabilních látek a zlepšuje reprodukovatelnost výsledků.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo demonstrovat možnosti zmenšení objemu extrahovaného vzorku pomocí technologie SOLAµ SPE bez ztráty analytické výkonnosti. Srovnání s konvenčními SPE metodami ukazuje, jak lze při desetkrát menším objemu vzorku dosáhnout stejné citlivosti a robustnosti analýzy.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorek

• 25 μl lidského plazmatického vzorku, ředěného 1:1 s 4% H3PO4
• Standardy niflumové kyseliny a deuterovaného interního standardu

Solid phase extraction

• SOLAµ WAX 96 well plate, 2 mg pryskyřice na jádro kondicionace, ekvilibrace, nanesení vzorku, promytí a dvojité eluční kroky (2×12,5 μl methanol/amoniak)
• Přímá injekce eluátu bez sušení

Chromatografie a detekce

• Dionex UltiMate 3000 RSLC s Accucore RP-MS kolonkou (50 × 2,1 mm, 2,6 μm)
• Gradient 70–10 % A/B do 2 min, návrat k počátečnímu stavu do 3 min, průtok 750 μl/min, teplota 30 °C
• TSQ Vantage MS/MS s HESI, pozitivní ionizace, S-linse 115 V, kolizní energie 22 V, skenovací doba 0,02 s
• Quantifikace v software LCQUAN verze 2.6

Hlavní výsledky a diskuse

Lineární rozsah metodiky pokrývá 1–1000 ng/ml s koeficientem R2 = 0,995. Limita kvantifikace 1 ng/ml vykazuje výrazný signál oproti šumu. Přesnost stanovení se pohybovala v rozmezí –10,4 až 11,9 %, s relativní odchylou RSD < 0,36 % u poměru ploch a < 7,4 % u plochy analytu. Obnova niflumové kyseliny překročila 98 % a matriční efekty byly nižší než 5 %. Porovnání extraktů z 250 μl na konvenčním SOLA WAX a 25 μl na SOLAµ WAX ukázalo téměř identickou intenzitu chromatografických signálů.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje:

• Desetinásobné snížení objemu vzorku bez nutnosti sušení
• Zvýšení citlivosti analýzy díky nízkým elučním objemům
• Zkrácení doby přípravy a zefektivnění workflow
• Lepší stabilitu termolabilních biomolekul

Budoucí trendy a možnosti využití

Technologie SOLAµ SPE lze uplatnit ve výzkumu mikro-objemů, klinickém testování s omezeným vzorkem, v biobankách a v omických aplikacích. Další vývoj může směřovat k integraci s automatizovanými platformami pro vysokopropustné analýzy a miniaturizaci dalších kroků přípravy vzorku.

Závěr

Studie ukazuje, že SOLAµ SPE je efektivní nástroj pro bioanalytické aplikace s omezeným objemem vzorku. Metoda zachovává vysokou přesnost, opakovatelnost, obnovu a čistotu vzorku při významném snížení pracovní zátěže a spotřeby vzorku.

Reference

• Thermo Fisher Scientific. Application Note No. 20942 SOLAµ SPE – vysoce reprodukovatelné bioanalytické výsledky s redukovanými objemy vzorku, 2019.