Keeping Your HPLC Column in Tip Top Shape

Význam tématu

Správná péče o HPLC kolonu je klíčová pro zachování analytické přesnosti, spolehlivosti a prodloužení životnosti sloupku. Prevence zanášení částicemi i chemickými kontaminanty snižuje provozní náklady a dobu údržby, a zároveň zajišťuje stabilní chromatografické výsledky.

Cíle a přehled článku

Článek shrnuje doporučené postupy před, během a po HPLC analýze s důrazem na:

• Prevence kontaminace rozpouštědel
• Použití inline filtrů a ochranných kolonek (guard columns)
• Správnou instalaci a provozní podmínky sloupků
• Oplach a skladování kolonek pro dlouhodobou stabilitu

Použitá metodika a instrumentace

Instrumentace:

• Agilent HPLC systém 1290 Infinity II
• InfinityLab Quick Change inline filtry a guard kolony
• Sady filtrů Captiva (syringe filters, filter vials, filter plates)
• Agilent solvent filtration assembly pro odstraňování sraženin
• InfinityLab Quick Connect a Quick Turn spojky pro minimalizaci mrtvého objemu

Metodika:

• Filtrace a de-gas mobilních fází denně
• Přidání mezivýplachu při změně pH nebo složení mobilní fáze
• Postupné zvyšování průtoku při instalaci sloupku
• Kontinuální kontrola zpětného tlaku a pH pro prevenci degradace sloupku

Hlavní výsledky a diskuse

Analýzy prokázaly, že:

• Inline filtry významně prodlužují životnost kolony odstraněním drobných částic z mobilní fáze i vzorku
• Guard kolony odfiltrují nechtěné složky a zabraňují ucpání frit
• Optimalizace vnitřního průměru a délky kapilár snižuje mrtvý objem a zlepšuje špičkovou symetrii i rozlišení
• U kolonek odolných vůči vysokému pH (HPH-C18) a nízkému pH (StableBond SB-C18) dochází k minimální ztrátě retence a účinnosti při dlouhodobém provozu v extrémním pH
• Postupy oplachu se silnými organickými a nepolárními rozpouštědly účinně odstraňují usazené složky

Přínosy a praktické využití metody

Implementace navržených preventivních kroků přináší:

• Snížení nákladů na výměnu a údržbu HPLC kolonek
• Vyšší reprodukovatelnost a přesnost analýz
• Zkrácení doby přerušení provozu kvůli čištění a opravám
• Možnost provozu agresivního pH bez předčasného poškození sloupku

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekávané směry dalšího rozvoje:

• Modulární rychle měnitelné filtrační systémy s detekcí zahlcení
• Nové hybridní povlaky částic odolné vůči širšímu rozsahu pH a teplot
• Integrované senzory tlaku a pH v blízkosti kolony pro automatizovanou údržbu
• Rozšíření guard kolon pro speciální aplikace (proteomika, metabolomika, farmacie)

Závěr

Prevence zanášení a degradace HPLC kolony pomocí kvalitní filtrace, guard sloupků, optimalizovaných kapilár a správných provozních podmínek významně zlepšuje výkon, spolehlivost a životnost analytického uspořádání. Dodržování uvedených postupů doporučených výrobcem Agilent vede k efektivnějšímu a ekonomičtějšímu provozu laboratorních HPLC systémů.

Reference

• Lane J. An Ounce of Prevention: Keeping Your HPLC Column in Tip Top Shape. Agilent Technologies, Application Note, 24.2.2022.
• Claessens H. A., van Straten M. A., Kirkland J. J. Bonded-phase packing degradation at high pH. Journal of Chromatography A, 728 (1996) 259–269.