HPLC determination of biogenic amines in beer by AQC derivatization

Význam tématu

Analýza biogenních aminů v pivu je klíčová pro hodnocení kvality, bezpečnosti potravin a hygienických podmínek při výrobě. Nadměrné množství aminů může indikovat bakteriální kontaminaci a ovlivnit chuťový profil.

Cíle a přehled studie

Cílem byla optimalizace reverzní fáze HPLC metody s derivatizací 6-aminochinoly-N-hydroxysuccinimidyl karbamátem (AQC) pro stanovení devíti biogenních aminů v pivech. Studie zahrnuje srovnání detekce UV a fluorescencí a kvantifikaci aminů v deseti komerčních vzorcích.

Použitá metodika

Vzorky piva byly přefiltrovány, naředěny a derivatizovány reakcí s AQC v borátovém pufru (pH ~8.8) při 55 °C po dobu 10 minut. Po chlazení byly vzorky naředěny vodou (1:5). K separaci byla použita kolona Accucore aQ C18 (2.1×100 mm, 2.6 µm) s mobilní fází A (50 mM acetát amonný, pH 5.0) a B (acetonitril) v gradientu 4–39 % B za 26 minut při průtoku 0.45 mL/min a teplotě 20 °C.

Použitá instrumentace

• HPLC: Thermo Scientific Vanquish Core Quaternary
• Kolona: Accucore aQ C18 (2.1×100 mm, 2.6 µm)
• Detekce: Vanquish Diode Array Detector CG (UV 248 nm) a Fluorescence Detector F (Ex. 248 nm, Em. 298 nm)
• Software: Thermo Scientific Chromeleon CDS v7.3

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila detekci všech derivatizovaných aminů kromě tryptaminu a spermidinu v pivních vzorcích. Fluorescenční detekce poskytla vyšší citlivost pro většinu aminů, u tryptaminu byl lepší poměr signál/šum při UV detekci kvůli fluorescence quenching efektu. Histamin byl u většiny vzorků pod detekčním limitem nebo byl zastiněn matricovým rušivým signálem a pouze u vzorku s nasycením byl patrný. Analýza deseti piv potvrdila koncentrace v souladu nebo pod úrovní literárních dat.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda je rychlá, robustní a nabízí nízké detekční limity, což umožňuje rutinní kontrolu kvality a sledování biogenních aminů v pivu a dalších fermentovaných nápojích. Derivatizace AQC poskytuje stabilní a reprodukovatelné produkty.

Budoucí trendy a možnosti využití

Možnosti zahrnují rozšíření na další matrice fermentovaných potravin, integraci HPLC–MS pro zlepšení selektivity, automatizaci přípravy vzorků a vývoj vysokopropustných metod pro hromadné screenování.

Závěr

Vyvinutá RP-HPLC metoda s AQC derivatizací pro stanovení biogenních aminů je spolehlivá, citlivá a snadno aplikovatelná v praxi. Poskytuje adekvátní rozlišení a reprodukovatelnost pro analýzu piva.

Reference

• Izquierdo-Pulido M. et al. Biogenic Amines in European Beers, J. Agric. Food Chem., 1996, 44 (10), 3159–3163