Characterization of intact mAb/SARS-CoV-2-S2 protein complexes by OmegaToF MS
Aplikace | 2022 | ShimadzuInstrumentace
Masová spektrometrie typu MALDI-TOF s rozšířeným hmotnostním rozsahem do 1500 kDa umožňuje přímou analýzu nedestruktivních proteinových komplexů. Tento přístup je zásadní při charakterizaci interakcí antigen–protilátka, které patří mezi klíčové kroky při vývoji terapeutických proteinů, včetně léčby onemocnění COVID-19.
Cílem studie bylo demonstrovat schopnost přístroje OmegaToF MALDI-TOF analyzovat vázané komplexy monoklonální protilátky proti subjednotce S2 spike proteinu viru SARS-CoV-2. Studie popisuje detekci jak volných komponent, tak kompletních antigenních komplexů před a po chemickém průvazku.
Vzorky antigenu SARS-CoV-2-S2 (2 pmol/μl) a monoklonální protilátky anti-SARS-CoV-2-S2 (1 pmol/μl) byly smíchány a aplikovány na MALDI desku. Pro spektrum bylo akumulováno 50 laserových výstřelů na profil, vyhodnoceno 200 profilů, výsledné spektrum založeno na průměrných hmotnostech.
Pro průvazkové experimenty byla směs antigenu a protilátky doplněna 1 μl činidla R200 (konečná koncentrace 1 mg/ml) a inkubována 180 minut při pokojové teplotě před měřením.
V rámci neprovázaných vzorků byly zaznamenány singly nabité ionty antigenu o hmotnosti ~87 kDa a protilátky ~148 kDa s vysokým poměrem signál/šum. Po průvazku se vyskytl hlavní signál komplexu s poměrem stoichiometrie 2:1 o hmotnosti ~343 kDa; slabší stopa komplexu 1:1 nebyla zaznamenána pravděpodobně díky vysoké afinitě a přebytku antigenu. Překrytí spekter kontrolního a průvazkového vzorku ukázalo posun signálu komplexu na ~326 kDa.
Metoda umožňuje rychlou a citlivou detekci intact proteinových komplexů bez nutnosti předchozí denaturace. Je vhodná pro screening a kvantifikaci interakcí antigen–protilátka v kontextu vývoje biologických léčiv, QA/QC v biotechnologickém průmyslu a výzkumu virových epitopek.
Očekává se další rozšíření hmotnostního rozsahu a zlepšení citlivosti přístrojů MALDI-TOF, integrace s chromatografickými a iontově mobilními technikami pro komplexní proteomické studie a kvantitativní analýzy interakcí v reálném čase. Dalším směrem je automatizace přípravy vzorků a optimalizace chemických průvazných protokolů.
Studie potvrdila, že OmegaToF MALDI-TOF představuje efektivní nástroj pro analýzu vysokomolekulárních netržných komplexů antigen–protilátka. Metoda přináší rychlé a spolehlivé výsledky, které podpoří vývoj nových terapeutických proteinů proti SARS-CoV-2 a dalším patogenům.
MALDI, LC/TOF, LC/MS
ZaměřeníFarmaceutická analýza
VýrobceShimadzu
Souhrn
Význam tématu
Masová spektrometrie typu MALDI-TOF s rozšířeným hmotnostním rozsahem do 1500 kDa umožňuje přímou analýzu nedestruktivních proteinových komplexů. Tento přístup je zásadní při charakterizaci interakcí antigen–protilátka, které patří mezi klíčové kroky při vývoji terapeutických proteinů, včetně léčby onemocnění COVID-19.
Cíle a přehled studie / článku
Cílem studie bylo demonstrovat schopnost přístroje OmegaToF MALDI-TOF analyzovat vázané komplexy monoklonální protilátky proti subjednotce S2 spike proteinu viru SARS-CoV-2. Studie popisuje detekci jak volných komponent, tak kompletních antigenních komplexů před a po chemickém průvazku.
Použitá metodika
Vzorky antigenu SARS-CoV-2-S2 (2 pmol/μl) a monoklonální protilátky anti-SARS-CoV-2-S2 (1 pmol/μl) byly smíchány a aplikovány na MALDI desku. Pro spektrum bylo akumulováno 50 laserových výstřelů na profil, vyhodnoceno 200 profilů, výsledné spektrum založeno na průměrných hmotnostech.
Pro průvazkové experimenty byla směs antigenu a protilátky doplněna 1 μl činidla R200 (konečná koncentrace 1 mg/ml) a inkubována 180 minut při pokojové teplotě před měřením.
Použitá instrumentace
- OmegaToF MALDI-TOF masový spektrometr (Shimadzu)
- R200 cross-linking reagent (CovalX)
Hlavní výsledky a diskuse
V rámci neprovázaných vzorků byly zaznamenány singly nabité ionty antigenu o hmotnosti ~87 kDa a protilátky ~148 kDa s vysokým poměrem signál/šum. Po průvazku se vyskytl hlavní signál komplexu s poměrem stoichiometrie 2:1 o hmotnosti ~343 kDa; slabší stopa komplexu 1:1 nebyla zaznamenána pravděpodobně díky vysoké afinitě a přebytku antigenu. Překrytí spekter kontrolního a průvazkového vzorku ukázalo posun signálu komplexu na ~326 kDa.
Přínosy a praktické využití metody
Metoda umožňuje rychlou a citlivou detekci intact proteinových komplexů bez nutnosti předchozí denaturace. Je vhodná pro screening a kvantifikaci interakcí antigen–protilátka v kontextu vývoje biologických léčiv, QA/QC v biotechnologickém průmyslu a výzkumu virových epitopek.
Budoucí trendy a možnosti využití
Očekává se další rozšíření hmotnostního rozsahu a zlepšení citlivosti přístrojů MALDI-TOF, integrace s chromatografickými a iontově mobilními technikami pro komplexní proteomické studie a kvantitativní analýzy interakcí v reálném čase. Dalším směrem je automatizace přípravy vzorků a optimalizace chemických průvazných protokolů.
Závěr
Studie potvrdila, že OmegaToF MALDI-TOF představuje efektivní nástroj pro analýzu vysokomolekulárních netržných komplexů antigen–protilátka. Metoda přináší rychlé a spolehlivé výsledky, které podpoří vývoj nových terapeutických proteinů proti SARS-CoV-2 a dalším patogenům.
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Characterization of intact monoclonal Antibody/Antigen complexes by the OmegaToF MS
2022|Shimadzu|Aplikace
No. SSI-MALDI-2201 COVALX Solutions for Protein Complex Analysis High Mass MALDI-TOF Mass Spectrometry MALDI-2201 Characterization of intact monoclonal Antibody/Antigen complexes by the OmegaToF MS ■ Introduction The ability of MALDI-TOF mass spectrometry to accurately perform protein detection is well recognized…
Klíčová slova
antigen, antigenantibody, antibodymonoclonal, monoclonalantibodies, antibodiesmaldi, maldicovalx, covalxomegatof, omegatofprotein, proteinbinding, bindingepitope, epitopemass, massintact, intactcomplex, complextwo, twocomplexes
Shimadzu OmegaTOF (Benchtop Linear High Mass MALDI-TOF Mass Spectrometer)
2022|Shimadzu|Brožury a specifikace
COVALX Solutions for Protein Complex Analysis Benchtop Linear High Mass MALDI-TOF Mass Spectrometer OmegaTOF OmegaTOF: A compact footprint without compromising on performance The OmegaTOF is the latest in a long line of MALDI-TOF products from Shimadzu. This is the first…
Klíčová slova
omegatof, omegatofcovalx, covalxmaldi, malditof, tofshimadzu, shimadzucleaning, cleaninginstruments, instrumentschoice, choicebenchtop, benchtopkeyhole, keyholelimpet, limpetdirectly, directlyprotein, proteinhexameric, hexamericmass
Detection of Ultra High-Mass Proteins Using the OmegaToF Mass Spectrometer
2022|Shimadzu|Aplikace
No. SSI-MALDI-2202 COVALX Solutions for Protein Complex Analysis High Mass MALDI-TOF Mass Spectrometry MALDI-2202 Detection of Ultra High-Mass Proteins Using the OmegaToF Mass Spectrometer ■ Introduction The ability of MALDI-TOF mass spectrometry to sensitively detect a protein’s mass is well…
Klíčová slova
klh, klhomegatof, omegatofigm, igmhemocyanin, hemocyaninkeyhole, keyholelimpet, limpetcovalx, covalxmass, massmaldi, maldiprotein, proteintof, tofdetect, detectproteins, proteinsreconstruction, reconstructionsensitively
Initial Development of SARS-CoV-2 Antigen Assay Using BAMS Technology and MALDI-TOF
2020|Bruker|Aplikace
Abundance Mass (m/z) Initial Development of SARS-CoV-2 Antigen Assay Using BAMS Technology and MALDI-TOF This work is focused on the development of a new SARS-CoV-2 spike glycoprotein assay based on Bead Assisted Mass Spectrometry (BAMS) assay platform with detection by…
Klíčová slova
microflex, microflexbams, bamsrapiflex, rapiflextof, tofassay, assaymaldi, maldibruker, brukerdevelopment, developmentglycoprotein, glycoproteinsmart, smartcoverage, coverageaffimer, affimerusing, usingbead, beadmeasurements
