Controlling Crosstalk of Amphetamine and Methamphetamine in Urine Assays Using 96 Well Plates for LC-MS/MS Analysis

Význam tématu

Evaporativní crosstalk mezi sousedními jamkami při vysoušení extraktů v 96-jamkových miskách může vést ke zkresleným výsledkům, zejména u těkavých analytů jako amfetamin a methamfetamin v moči. Kontrola tohoto efektu je klíčová pro klinické, forenzní i průmyslové aplikace, kde vysoké koncentrace analyzovaných látek mohou vyvolat falešně pozitivní nebo falešně negativní nálezy.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem práce bylo zhodnotit a optimalizovat postupy potlačení evaporativního crosstalku v extrakci moči pomocí 96-jamkových desek a LC-MS/MS analýzy. Autoři testovali kombinaci ADAPTÉRU Biotage ACT Plate Adapter a přídavku kyseliny chlorovodíkové v methanolu v různých koncentracích, aby dosáhli splnění limitů stanovených standardy (SAMHSA).

Použitá metodika a instrumentace

Popis postupu extrakce a analýzy:

• Příprava vzorku: 150 µL moči + 165 µL pufru a methanolu (bez enzymové hydrolýzy).
• Předúprava: 300 µL 0,1 % NH4OH.
• Extrakce: ISOLUTE SLE+ 400 µL, eluovány 2×600 µL dichlormetanu/2-propanolu (90:10).
• Sušení: Biotage SPE Dry (40 °C horní, 60 °C spodní, 40/30 L/h N2) s nebo bez ACT Plate Adapteru.
• Přídavek: 10 µL HCl v MeOH (0,25 % nebo 0,5 %) před vysoušením.
• Analýza: Shimadzu Nexera UPLC + Sciex 5500 QqQ MS/MS podle protokolu Biotage Urine White Paper.

Klíčová instrumentace byla shrnuta v samostatném výčtu výše.

Hlavní výsledky a diskuse

Výsledky ukázaly:

• Žádný crosstalk u polárních netěkavých analyzovaných látek (benzoylecgonin, morfin, hydromorfon).
• U MDA, MDEA, MDMA detekováno crosstalk <5 ng/mL, redukováno pomocí adapteru.
• U amfetaminu a methamfetaminu bez adapteru crosstalk 2–200 ng/mL, s adapterem 1–100 ng/mL.
• Nejlepší potlačení (crosstalk <30 ng/mL) dosaženo s ACT Plate Adapterem a 10 µL 0,5 % HCl v MeOH.

Optimalizovaný protokol splňuje požadavky klinických a forenzních cutoffů SAMHSA (250 ng/mL).

Přínosy a praktické využití metody

Metoda poskytuje spolehlivou kontrolu crosstalku při vysokých koncentracích sympatomimetik v moči, minimalizuje falešné nálezy a zvyšuje robustnost LC-MS/MS analýzy v laboratorních QA/QC a forenzních aplikacích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Možné směry dalšího rozvoje:

• Optimalizace objemů elučního roztoku a objemu vzorku (např. menší desky 200 µL).
• Automatizace manipulace s adapterem a přídavnými reagenciemi.
• Rozšíření přístupu na další těkavé a polo­těkavé analyty v různých biologických matricích.
• Použití pokročilých povrchových úprav desek pro lepší zadržení analyzovaných látek.

Závěr

Kombinace Biotage ACT Plate Adapteru a přídavku 10 µL 0,5 % HCl v methanolu představuje efektivní řešení pro eliminaci evaporativního crosstalku amfetaminu a methamfetaminu v extrakci moči na 96-jamkových destičkách. Protokol je kompatibilní s běžnými LC-MS/MS platformami a splňuje regulační požadavky.