Extraction of Veterinary Growth Promoters from Animal Urine Using ISOLUTE® HYDRO DME+ Prior to UPLC-MS/MS Analysis

Význam tématu

Veterinární růstové promotory představují skupinu steroidů, resorcylických kyselin a stilbenů používaných v živočišné výrobě ke zvýšení růstu hospodářských zvířat. Jejich nepovolené použití ohrožuje potravinovou bezpečnost a zdraví spotřebitelů. Citlivá a spolehlivá analýza těchto látek v moči zvířat je proto klíčová pro kontrolu a dodržování legislativy. Metoda extrakce pomocí ISOLUTE HYDRO DME+ v kombinaci s UPLC-MS/MS nabízí efektivní odbourání matricových interferencí a vysokou obnovu analyzovaných sloučenin.

Cíle a přehled studie

Cílem studie je optimalizovat a validovat postup extrakce osmnácti veterinárních růstových promoterů z moči hospodářských zvířat pomocí sorbentu ISOLUTE HYDRO DME+ před analýzou UPLC-MS/MS. Studie demonstruje účinnost vzorkovacího protokolu v kolonkách a 96-well deskách, hodnotí obnovy, opakovatelnost, linearitu kalibračních křivek a limity stanovení jednotlivých látek.

Použitá metodika a instrumentace

• Vzorkování a příprava: 75 µL moči ze čtyř druhů zvířat (skot, kůň, ovce, prase) hydrolyzováno enzymem β-glukuronidáza (60 °C, 2 h), naředěno amonným acetátem pH 5,2.
• Extrakce: 150 µL hydrolyzátu smícháno s acetonitrilem 1:6, aplikováno na 400 mg ISOLUTE HYDRO DME+ kolonu/desku, extrahováno za tlaku ≈5 psi, eluát odpařen při 40 °C a rekonstituován v 0,1 % kyselině mravenčí ve 50 % metanolu.
• Chromatografie: UPLC Shimadzu Nexera s kolonkou ACE UltraCore Super C18 (100 × 2,1 mm, 2,5 µm), gradient amonného acetátu a methanolu, průtok 0,5 mL/min, injekce 10 µL, teplota 45 °C.
• Hmotnostní spektrometrie: Sciex TripleQuad 5500 v režimu ESI v pozitivní i negativní polaritě, optimalizovaná nastavení pro MRM přechody.

Hlavní výsledky a diskuse

Extrakční postup s ISOLUTE HYDRO DME+ dosahuje průměrných celkových obnov přes 80 % u většiny analyzovaných látek s RSD pod 5 %. Dolní hranice kvantifikace (LOQ) jsou stanoveny na 0,4 ng/mL a kalibrace vykazují lineární vztah (0,4–10 ng/mL) s koeficienty r² > 0,997. Chromatogramy v režimech +ESI a –ESI jsou bez významných interferencí matric.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoká selektivita a citlivost umožňují spolehlivé monitorování zakázaných růstových látek v rámci QA/QC a regulačních kontrol.
• Modularita formátu (kolonky a 96-well desky) podporuje škálovatelnost a automatizaci v rutinních laboratořích.
• Jednoduchý a rychlý workflow minimalizuje spotřebu chemikálií a pracovní dobu operátora.

Budoucí trendy a možnosti využití

Metoda může být rozšířena o další metabolity či nové třídy růstových látek. Implementace pokročilých chromatografických sloupců s menšími částicemi a nových ionizačních technik by mohla zvýšit citlivost a zkrátit dobu analýzy. Integrace s automatizovanými přípravnými systémy a online SPE otevírá cestu k plně robotizovaným laboratořím.

Závěr

Optimalizovaný protokol extrakce pomocí ISOLUTE HYDRO DME+ před UPLC-MS/MS poskytuje robustní, přesnou a citlivou metodu pro detekci a kvantifikaci veterinárních růstových promoterů v moči. Splňuje požadavky na obnovení, opakovatelnost i linearitu a je vhodný pro rutinní monitoring a regulační kontroly.

Reference

• Application Note AN925, Biotage, 2019