Multi-class veterinary drugs analyses of QuEChERS extracts using an automated online μSPE cleanup coupled to LC-MS/MS

Význam tématu

Analýza reziduí veterinárních léčiv v potravinových produktech živočišného původu je klíčová pro dodržení maximálních reziduálních limitů stanovených regulačními orgány. Rychlé a spolehlivé postupy přípravy vzorků a čištění extraktů před LC-MS/MS vyšetřením minimalizují ionizační potlačení, zvyšují reprodukovatelnost výsledků a prodlužují živostnost analytického systému.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo demonstrovat plně automatizované online čištění QuEChERS extraktů z masných a orgánových vzorků pomocí miniaturizovaných μSPE cartridgí, jejich propojení s UHPLC-MS/MS a porovnat výkonnost manuálního dSPE, automatizovaného μSPE se sorbentem CEC18 a μSPE se sorbentem HyperSep Retain-PEP (HRP). Testovací matice zahrnovaly bovinní svalovinu, játra a ledviny s 103 analytickými cíli.

Použitá instrumentace

• Robotic TriPlus RSH μSPE autosampler (CTC Analytics) s online μSPE cartridgemi CEC18 a HRP
• Vanquish Flex UHPLC systém
• TSQ Altis triple quadrupole hmotnostní spektrometr s H-ESI ionizační hlavicí
• Accucore VDX kolona 100×2,1 mm, 2,6 µm, 40 °C

Použitá metodika

Vzorky homogenizované QuEChERS extrakcí (acetonitril + soli + chelátor) podrobeny online μSPE čištění. Cartridže se kondicionují metanol-vodními protely, extrakt je push-nut stálou silou stříkačky přes sorbent, eluát se vkládá do LC vzorku pomocí sandwich injekce (20 µL mobilní fáze A – 2 µL vzorku – 20 µL mobilní fáze A). Použit byl gradientní eluce s formiátovým pufrem a směsí MeOH/ACN, sledované SRM přechody v pozitivním i negativním módu.

Hlavní výsledky a diskuse

• Linearity 1–100 ng/g, R² > 0,99 pro většinu analytů.
• Absolutní recoverie 30–140 % s RSD ≤ 20 % pro více než 95 % sloučenin u dSPE i μSPE CEC18.
• Metoda μSPE HRP vykazovala selektivní ztráty některých apolárních látek (rafoxanid, lasalocid).
• Matrixové efekty převažovaly v kategorii nízké až střední (ME < 50 % u ~80 % analytů).
• Přesnost (RSD) < 20 % pro 100 % injekcí, stabilita signálu v řadě 100 analýz bez údržby.
• Automatické kalibrační skripty s přípravou MMS uvnitř autosampleru šetří čas a minimalizují chyby.

Přínosy a praktické využití metody

Automatizace μSPE clean-up snižuje čas přípravy o 4–5 hodin na 50 vzorků, eliminuje manuální vážení sorbentů, redukuje spotřebu rozpouštědel i plastového spotřebního materiálu, zvyšuje opakovatelnost a snižuje riziko kontaminace. Metoda je vhodná pro rutinní screening i kvantitativní stanovení reziduí veterinárních léčiv.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření μSPE automatizace na další matrice (mléko, vejce), vývoj nových sorbentů pro cílené čištění konkrétních tříd látek, integrace s vysokorychlostními hmotovkami a pokročilá datová analýza pro nelineární kalibrace a screening neznámých metabolitů.

Závěr

Automatizované online μSPE čištění QuEChERS extraktů v kombinaci s LC-MS/MS poskytuje rychlý, robustní a reprodukovatelný postup pro multi-třídní analýzu 103 veterinárních léčiv v živočišných tkáních. Metoda šetří čas, materiál, minimalizuje chyby a prodlužuje živostnost systému.

Reference

• Anastassiades M, Lehotay SJ, Stajnbaher D, Schenck FJ. J AOAC Int 86:412–431 (2003).
• Lehotay SJ, Han L, Sapozhnikova Y. Chromatographia, doi:10.1007/s10337-016-3116-y.
• AOAC SMPR 2018.010.
• Furey A, Moriarty M, Bane V, Kinsella B, Lehane M. Talanta 115:104–122 (2013).
• EU SANTE/12682/2019.